[發明專利]使用即時檢測裝置進行病原體富集和核酸提取的方法

在審

• 申請號: 201980055050.0
• 申請日: 2019-08-22
• 公開（公告）號: CN112639095A
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 愼鏞;李銀永;趙飛
• 申請（專利權）人: 注入技術公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;G01N35/00
• 代理公司: 北京信慧永光知識產權代理有限責任公司 11290
• 代理人: 楊國強;張淑珍

1.一種用于即時檢測的病原體富集和核酸提取裝置，所述裝置包括：

進口；

連接至所述進口的反應單元，所述反應單元對通過所述進口引入的含有病原體的樣品、交聯劑和用硅烷化合物改性的硅藻土進行混合；

連接至所述反應單元的過濾器單元，所述過濾器單元能夠阻擋含有病原體的樣品、交聯劑和用硅烷化合物改性的硅藻土，并使得具有與核酸對應尺寸的物質通過；以及

連接至所述過濾器單元的出口單元，所述出口單元對核酸進行分離。

2.如權利要求1所述的用于即時檢測的病原體富集和核酸提取裝置，其中，所述過濾器具有平均直徑為0.5-1μm的孔，并且具有10-30mm的直徑和1-10mm的厚度。

3.如權利要求1所述的用于即時檢測的病原體富集和核酸提取裝置，其中，所述過濾器選自于由納米和微米濾膜過濾器、反滲透過濾器、中空纖維膜過濾器以及超濾膜過濾器所組成的組。

4.一種病原體富集和核酸提取方法，所述方法包括：

第一步，提供權利要求1-3中任一項所述的用于即時檢測的病原體富集和核酸提取裝置；

第二步，通過所述裝置的進口引入含有病原體的樣品、交聯劑和用硅烷化合物改性的硅藻土；

第三步，在所述裝置的反應單元中，通過交聯劑將所述病原體固定在所述用硅烷化合物改性的硅藻土表面；

第四步，通過所述裝置的所述進口引入裂解緩沖溶液；

第五步，在所述裝置的所述反應單元中，將從所述病原體中提取的核酸固定到所述用硅烷化合物改性的硅藻土表面；

第六步，通過所述裝置的所述進口引入洗脫緩沖液；以及

第七步，通過所述裝置的過濾器單元分離所述核酸，并通過出口單元獲得所述核酸。

5.如權利要求4所述的病原體富集和核酸提取方法，其中，第二步中的含有所述病原體的所述樣品為選自于由以下樣品所組成的組中的任一種：疑似感染所述病原體的對象的糞便、尿液、淚液、唾液、皮膚外分泌物、呼吸道外分泌物、腸道外分泌物、消化道外分泌物、血漿、血清、血液、脊髓液、淋巴液、體液和組織。

6.如權利要求4所述的病原體富集和核酸提取方法，其中，第二步中的所述病原體是微生物。

7.如權利要求6所述的病原體富集和核酸提取方法，其中，所述微生物為病毒、細菌、真菌、原生動物、立克次氏體或螺旋體。

8.如權利要求4所述的病原體富集和核酸提取方法，其中，第二步中的所述交聯劑選自于由辛二亞氨酸二甲酯(DMS)、己二亞氨酸二甲酯(DMA)、庚二亞氨酸二甲酯(DMP)和3,3′-二硫代雙丙亞氨酸二甲酯(DTBP)所組成的組。

9.如權利要求4所述的病原體富集和核酸提取方法，其中，第二步中的所述硅烷化合物為選自于由以下化合物所組成的組中的任一種：3-氨基丙基(二乙氧基)甲基硅烷(APDMS)、(3-氨基丙基)三乙氧基硅烷(APTES)、(3-氨基丙基)三甲氧基硅烷、(1-氨基甲基)三乙氧基硅烷、(2-氨基乙基)三乙氧基硅烷、(4-氨基丁基)三乙氧基硅烷、(5-氨基戊基)三乙氧基硅烷、(6-氨基己基)三乙氧基硅烷、N-[3-(三甲氧基硅烷基)丙基]乙二胺、N-[3-(三甲氧基硅烷基)丙基]二亞乙基三胺、[3-(2-氨基乙基氨基)丙基]三甲氧基硅烷(AEAPTMS)和3-[(三甲氧基硅烷基)丙基]二亞乙基三胺(TMPTA)。

10.如權利要求4所述的病原體富集和核酸提取方法，其中，在第三步中，通過靜電結合作用將帶負電荷的病原體用交聯劑固定在用帶正電荷的硅烷化合物改性的硅藻土表面。

11.如權利要求4所述的病原體富集和核酸提取方法，其中，在第五步中，通過與所述用硅烷化合物改性的硅藻土的胺基團發生可逆交聯，將從所述病原體中提取的所述核酸固定在所述硅藻土表面。