[發明專利]GFRAL細胞外結構域和使用方法

在審

• 申請號: 201980052565.5
• 申請日: 2019-08-09
• 公開（公告）號: CN112543869A
• 公開（公告）日: 2021-03-23
• 發明（設計）人: 白吉榮;K·A·黑爾德魏因;L·D·林德斯利
• 申請（專利權）人: 諾華股份有限公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;C07K14/71
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 張莉;黃革生

1.一種檢測GDF15肽的活性的方法，所述方法包括：

(i)

(a)提供表達細胞表面受體激酶的細胞；

(b)使所述細胞與所述GDF15肽和可溶性GFRAL接觸，其中所述可溶性GFRAL包含有包含結構域D2和D3的GFRAL細胞外結構域；以及

(c)檢測所述經接觸細胞中的生物學反應；或

(ii)

(a)提供表達細胞表面受體激酶以及包含結構域D2和D3的GFRAL細胞外結構域的細胞；

(b)使所述細胞與所述GDF15肽接觸；以及

(c)檢測所述經接觸細胞中的生物學反應。

2.如權利要求1所述的方法，其中所述GFRAL細胞外結構域缺乏結構域D1。

3.如權利要求1或2所述的方法，所述方法提供表達細胞表面受體激酶和GFRAL細胞外結構域的細胞，其中

(i)所述GFRAL細胞外結構域是可溶性GFRAL細胞外結構域，或

(ii)所述GFRAL細胞外結構域通過系鏈與細胞表面附接。

4.如權利要求3所述的方法，其中所述系鏈

(i)是GFRAL跨膜結構域或其功能片段；

(ii)包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列或其功能變體；

(iii)是與所述GFRAL細胞外結構域融合的異源跨膜結構域；

(iv)是糖磷脂酰肌醇(GPI)；

(v)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列或其功能變體、SEQ ID NO:20的氨基酸序列或其功能變體或者SEQ ID NO:21的氨基酸序列或其功能變體；

(vi)是膜插入序列；

(vii)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列或其功能變體，或者SEQ ID NO:23的氨基酸序列或其功能變體；或

(viii)是膜插入脂肪酸。

5.如權利要求1至4中任一項所述的方法，其中所述GFRAL細胞外結構域進一步包含信號肽。

6.如權利要求1至5中任一項所述的方法，其中所述GFRAL細胞外結構域用選自淀粉樣β前體蛋白標簽、組氨酸標簽、FLAG標簽和myc標簽的親和標簽標記。

7.如權利要求1至6中任一項所述的方法，其中所述GFRAL細胞外結構域

(i)包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或其功能變體；

(ii)與SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性；

(iii)與SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性；

(iv)包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或其功能變體；

(v)與SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性；

(vi)與SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性；

(vii)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或其功能變體；或

(viii)包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列或其功能變體。

8.如權利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述GDF15肽或其功能變體

(i)包含SEQ ID NO:13、14、15、16或17的氨基酸序列或其功能變體；

(ii)與SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性；或

(iii)與SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性。

9.如權利要求1至8中任一項所述的方法，其中所述GDF15肽

(i)用選自淀粉樣β前體蛋白標簽、組氨酸標簽、FLAG標簽和myc標簽的親和標簽標記；

(ii)與人血清白蛋白、小鼠血清白蛋白、免疫球蛋白恒定區或α-1-抗胰蛋白酶融合；

(iii)與脂肪酸綴合；

(iv)具有PEG化；和/或

(v)具有糖基化。