[發明專利]擴增方法在審
| 申請號： | 201980047190.3 | 申請日： | 2019-06-07 |
| 公開（公告）號： | CN112424374A | 公開（公告）日： | 2021-02-26 |
| 發明（設計）人： | A·A·莫利 | 申請（專利權）人： | 莫諾匡特私人有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6848 | 分類號： | C12Q1/6848;C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 永新專利商標代理有限公司 72002 | 代理人： | 左路;區斌 |
| 地址： | 澳大利亞南*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 擴增 方法 | ||
1.一種擴增Ig或TCR核酸區的方法，所述Ig或TCR核酸區的特征在于兩個或更多個V、D或J基因片段的重排，所述方法包含使感興趣的核酸樣品與針對所述重排的Ig或TCR核酸區的正向引物和反向引物接觸，并使用以下擴增所述核酸樣品：
(i)Tm為至少67℃的至少一種引物和/或
(ii)退火溫度為至少70℃。
2.根據權利要求1所述的方法，其中使用Tm為至少67℃的至少一種引物且退火溫度為至少70℃進行所述方法。
3.根據權利要求1或2中任一項所述的方法，其中所述至少一種引物是ASO引物。
4.根據權利要求3的方法，其中所述ASO引物是正向引物。
5.根據權利要求1至4中任一項所述的方法，其中所述核酸區是DNA區。
6.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，其中所述主題引物的Tm為67-80℃、68-76℃或69-74℃。
7.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，其中所述退火溫度是為70℃、71℃、72℃、73℃、74℃、75℃、76℃、77℃、78℃、79℃、80℃、81℃、82℃或83℃。
8.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，其中所述退火溫度為70℃-83℃、71℃-80℃、70℃-77℃、71℃-77℃或72℃-75℃。
9.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，其中所述至少一種引物的Tm為67℃-80℃和/或所述退火溫度為70℃-83℃。
10.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，其中所述至少一種引物的Tm為69℃至76℃，并且所述退火溫度是70℃至78℃。
11.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，其中所述至少一種引物的Tm為69℃至76℃，并且所述退火溫度是72℃至75℃。
12.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，其中所述至少一種引物的Tm為69℃至72℃，并且所述退火溫度是72℃。
13.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，其中所述至少一種引物的Tm為72℃或更高，并且所述退火溫度為75℃。
14.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，其中在所述引物的3’端包括一個或多個A和/或T核苷酸。
15.根據權利要求14的方法，其中將所述正向或反向引物之一或兩者設計成包括所述A和/或T核苷酸。
16.根據權利要求14所述的方法，其中僅將所述反向引物設計成包括所述A和/或T核苷酸。
17.根據權利要求1至16中任一項或多項所述的方法，其中所述引物中的至少一個包含針對所述重排的V、D和J基因片段的至少兩個N基因片段的雜交亞區。
18.根據權利要求17所述的方法，其中所述V、D、J重排是部分重排。
19.根據權利要求18所述的方法，其中所述部分V、D、J重排是DNJ或VNJ重排，其還包含所述D、J或V基因片段內的至少一個N區。
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