[發明專利]通過利用內源激活誘導性胞嘧啶脫氨酶改造B淋巴細胞

在審

• 申請號: 201980046344.7
• 申請日: 2019-05-29
• 公開（公告）號: CN112384627A
• 公開（公告）日: 2021-02-19
• 發明（設計）人: A·蘭扎韋基亞;K·德拉洛薩;P·帕帕羅迪斯
• 申請（專利權）人: 生物醫學研究所
• 主分類號: C12N15/90
• 分類號: C12N15/90;C12N9/78;C07K16/00;C12N5/0781;C12N15/87
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 王永偉

1.用于編輯分離的B淋巴細胞的基因組的方法，包括以下步驟：

(i)激活所述B淋巴細胞的內源激活誘導性胞嘧啶脫氨酶；和

(ii)將DNA分子引入所述B淋巴細胞，所述DNA分子包括編碼目標(多)肽的核苷酸序列。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述方法不涉及外源核酸酶和/或改造的核酸酶，如CRISPR核酸酶、鋅指核酸酶、轉錄激活劑樣核酸酶或大范圍核酸酶。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中所述DNA分子是線性或線性化DNA分子。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其中所述DNA分子是單鏈DNA分子(ssDNA)或雙鏈DNA分子(dsDNA)。

5.根據權利要求4所述的方法，其中所述DNA分子是dsDNA分子。

6.根據權利要求5所述的方法，其中所述DNA分子具有平端或突出端。

7.根據權利要求1-6中任一項所述的方法，其中編碼所述目標(多)肽的所述DNA分子的核苷酸序列是密碼子優化的。

8.根據權利要求1-7中任一項所述的方法，其中所述DNA分子包括在編碼所述目標(多)肽的核苷酸序列的上游和/或下游的內含子序列。

9.根據權利要求8所述的方法，其中所述內含子序列包括剪接識別位點。

10.根據權利要求8或9所述的方法，其中所述內含子序列包含Ig基因座內含子序列。

11.根據權利要求10所述的方法，其中所述內含子序列包括J段下游內含子的內含子序列和/或CH上游內含子的內含子序列。

12.根據權利要求1-11中任一項所述的方法，其中所述DNA分子包括剪接增強子。

13.根據權利要求1-12中任一項所述的方法，其中所述B淋巴細胞的基因組被編輯以表達修飾的免疫球蛋白鏈，所述修飾的免疫球蛋白鏈在N端至C端方向上包括：可變域、所述目標(多)肽和恒定域。

14.根據權利要求1-13中任一項所述的方法，其中所述B淋巴細胞的基因組被編輯以表達修飾的免疫球蛋白鏈，其中內源可變域被所述目標(多)肽替代。

15.根據權利要求1-14中任一項所述的方法，其中所述DNA分子包括在編碼所述目標(多)肽的核苷酸序列上游和/或下游的編碼剪切位點的核苷酸序列。

16.根據權利要求15所述的方法，其中所述剪切位點是T2A剪切位點。

17.根據權利要求1-16中任一項所述的方法，其中所述目標(多)肽包括病原結合域、V_H域或V_H–V_L域或由其組成。

18.根據權利要求1-17中任一項所述的方法，其中所述目標(多)肽包括下列或由下列組成：CD4、二肽基肽酶4、CD9、或血管緊張素轉換酶2或其片段或序列變體。

19.根據權利要求1-18中任一項所述的方法，其中所述分離的B淋巴細胞是原代B淋巴細胞。

20.根據權利要求1-19中任一項所述的方法，其中所述方法包括獲得改造的B淋巴細胞，其中所述B淋巴細胞的基因組包括編碼所述目標(多)肽的核苷酸序列。