[發明專利]FX活化方法及其在FXa組合物制備中的用途

在審

• 申請號: 201980045449.0
• 申請日: 2019-07-08
• 公開（公告）號: CN112423782A
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發明（設計）人: 朱爾根·羅蘭·羅米什;凱瑟琳·波克;佩特拉·舒爾茨;西爾維奧·烏施科;邁克爾·安德斯納;安德烈·穆蘭尼
• 申請（專利權）人: 瑞士奧克特琺瑪公司
• 主分類號: A61K38/48
• 分類號: A61K38/48;C12N9/64
• 代理公司: 北京弘權知識產權代理事務所(普通合伙) 11363
• 代理人: 郭放;許偉群

1.一種將凝血因子X(FX)活化為活化凝血因子X(FXa)的方法，其中所述方法在體外進行，包括以下步驟：

a.提供含有FX的組合物；和

b.使所述FX與磷脂酰絲氨酸(PS)和鈣接觸以形成活化組合物；和

C.溫育所述活化組合物以使得FX轉化為FXa。

2.根據權利要求1所述的將FX活化為FXa的方法，其中，在溫育之前、期間和之后，不向所述組合物中添加蛋白質活化劑。

3.根據權利要求1或2所述的將FX激活為FXa的方法，其中，所述FX是衍生自血漿的FX。

4.根據前述權利要求中任一項所述的將FX活化為FXa的方法，其中，從FX轉化為FXa的產率為至少10％，優選地，該轉化的產率在20％-100％的范圍內。

5.根據前述權利要求中任一項所述的將FX活化為FXa的方法，其中，所述活化組合物中FX的起始濃度在2至80IU/ml的范圍內，優選在2至40IU/ml范圍內。

6.根據前述權利要求中任一項所述的將FX活化為FXa的方法，其中，所述活化組合物中的磷脂酰絲氨酸的濃度在0.05至100mM的范圍內，優選在0.1至50mM范圍內，更優選在0.2至10mM范圍內，最優選在0.2至1mM范圍內，并且所述磷脂酰絲氨酸是合成的磷脂酰絲氨酸。

7.根據前述權利要求中任一項所述的將FX活化為FXa的方法，其中，所述鈣為離子形式，并且所述活化組合物中鈣離子的濃度在1至100mM的范圍內，優選在2.5至50mM范圍內，更優選在5至40mM范圍內，最優選在10至35mM范圍內。

8.根據前述權利要求中任一項所述的將FX活化為FXa的方法，其中，所述含有FX的組合物進一步包含FII，并且其中，所述活化組合物中的FII的濃度在0.01至30IU/ml、特別是0.01至1IU/ml的范圍內。

9.根據前述權利要求中任一項所述的將FX活化為FXa的方法，其中，所述活化組合物的pH在5.0至9.0的范圍內，特別是在7.4至7.6范圍內。

10.根據前述權利要求中任一項所述的將FX活化為FXa的方法，其中，在溫育期間所述活化組合物的溫度在15-40℃的范圍內，優選在15-35℃范圍內。

11.根據前述權利要求中任一項所述的將FX活化為FXa的方法，其中，所述溫育的時間在1至48小時、特別是4至20小時的范圍內。

12.一種從含有FX和FXa的溶液中除去FX的方法，其包括以下步驟：

a.在適合于結合FXa的條件下，特別是pH在5.8至9.0的范圍內、優選在6.8至8.0范圍內時，使含有FX和FXa的溶液與肝素親和樹脂、特別是樹脂相接觸；

b.從所述溶液中分離出所述肝素親和樹脂；

c.可選地，洗滌所述肝素親和樹脂；以及

d.可選地，在適合洗脫的條件下，特別是使用NaCl在0.01至0.30M范圍內并且pH值在5.8至9.0范圍內的洗脫緩沖液，從所述肝素親和樹脂中洗脫所述FXa。

13.樹脂用于從含有FXa和FX的組合物中除去FXa或FX的用途。

14.一種制備FXa組合物的方法，其包括根據權利要求1至11中任一項所述的活化方法，并且進一步包括至少一個純化步驟。

15.根據權利要求14所述的制備方法，其中，所述至少一個另外的純化步驟選自固定化金屬親和色譜法(IMAC)、陰離子交換色譜法(AEX)和親和色譜法(AF)。