[發(fā)明專利]試驗(yàn)樣品中所含的酸性粘多糖或其鹽的分析方法、硫酸軟骨素或其鹽的定量方法及制品的品質(zhì)管理試驗(yàn)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201980043220.3
• 申請(qǐng)日: 2019-06-20
• 公開（公告）號(hào): CN112352156A
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 笠島直樹;船木亜?dòng)商?/a>
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 三得利控股株式會(huì)社
• 主分類號(hào): G01N27/447
• 分類號(hào): G01N27/447;G01N27/27
• 代理公司: 北京信慧永光知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11290
• 代理人: 洪俊梅;張淑珍

本發(fā)明涉及一種試驗(yàn)樣品中所含的酸性粘多糖或其鹽的分析方法，其特征在于，包含將含有酸性粘多糖或其鹽的試驗(yàn)樣品提供給定性試驗(yàn)及定量試驗(yàn)，上述定性試驗(yàn)包含將上述試驗(yàn)樣品提供給使用膜的電泳的電泳工序，用阿爾新藍(lán)對(duì)電泳后的膜進(jìn)行染色的染色工序，及由上述染色中所得的帶型確認(rèn)上述試驗(yàn)樣品中的酸性粘多糖或其鹽的種類的檢測(cè)工序，上述定量試驗(yàn)包含通過(guò)使用可檢測(cè)酸性粘多糖或其鹽的色素的比色法對(duì)上述試驗(yàn)樣品中的酸性粘多糖或其鹽進(jìn)行定量的比色定量工序。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及試驗(yàn)樣品中所含的酸性粘多糖或其鹽的分析方法。此外，本發(fā)明涉及試驗(yàn)樣品中所含的硫酸軟骨素或其鹽的定量方法。此外，本發(fā)明涉及含有酸性粘多糖或其鹽的制品的品質(zhì)管理試驗(yàn)方法。

背景技術(shù)

酸性粘多糖為結(jié)構(gòu)中具有羧酸等酸性基的粘多糖。酸性粘多糖，根據(jù)構(gòu)成其二糖單元的糖醛酸(或半乳糖)及氨基糖的種類及組合，分類為硫酸軟骨素、透明質(zhì)酸、硫酸皮膚素等。由于酸性粘多糖在體內(nèi)表現(xiàn)出生理活性，因此其定性及定量，在對(duì)健康食品或醫(yī)藥品所期待的效果進(jìn)行預(yù)測(cè)或判定時(shí)，或在制品的品質(zhì)管理等中有用。

硫酸軟骨素具有D-葡糖醛酸與N-乙酰-D-半乳糖胺鍵合而得的二糖單元的重復(fù)結(jié)構(gòu)，為N-乙酰-D-半乳糖胺的一部分羥基被硫酸化的酸性粘多糖。

作為硫酸軟骨素的定量法，已知有用硫酸軟骨素酶ABC對(duì)硫酸軟骨素進(jìn)行水解，用HPLC測(cè)定所生成的不飽和二糖類的量的HPLC法。作為HPLC法以外的硫酸軟骨素量的定量方法，有檢測(cè)具有硫酸基的化合物的硫酸鋇重量法、檢測(cè)葡糖醛酸或脫硫化物的咔唑硫酸法、檢測(cè)酸性粘多糖的阿爾新藍(lán)比色法等分析方法。

作為分離多種酸性粘多糖的方法，探討有膜電泳法。非專利文獻(xiàn)1中記載有，用硝化纖維素膜Immobilon(制品名，Millipore)對(duì)含有硫酸軟骨素等酸性粘多糖的樣品進(jìn)行電泳，通過(guò)實(shí)施阿爾新藍(lán)染色來(lái)實(shí)施酸性粘多糖的分離及鑒定。于該非專利文獻(xiàn)1中使用的膜為硝化纖維素和醋酸纖維素的混合膜。

非專利文獻(xiàn)

非專利文獻(xiàn)1：VolpiN.,Anal.Biochem.,240,114-118(1996)。

發(fā)明內(nèi)容

將酸性粘多糖作為健康食品或醫(yī)藥品的有效成分調(diào)配時(shí)，制品中所含的酸性粘多糖的種類及量的確定較為重要。然而，由于酸性粘多糖構(gòu)成單元的結(jié)構(gòu)類似，特異性也類似的情況較多，為難以分析的成分之一。如上所述，作為硫酸軟骨素的定量法，已知有HPLC法，但用HPLC法對(duì)制品等進(jìn)行分析時(shí)，存在容易受制品中調(diào)配的賦形劑或其他原料(例如阻礙酶的多酚等)的影響的問(wèn)題。此外在HPLC法中，需要昂貴且大型的HPLC裝置等，用于硫酸軟骨素的分解的水解酶，或用于鑒定硫酸軟骨素的標(biāo)準(zhǔn)品也昂貴，還存在因來(lái)源而適合的標(biāo)準(zhǔn)品并無(wú)銷售的情況。由此，期望可以不使用這樣的大型的裝置，以更低成本，簡(jiǎn)便地分析酸性粘多糖或其鹽的方法。如上所述，還已知HPLC法以外的定量方法，然而就硫酸鋇重量法而言，由于酸性粘多糖以外的硫酸基也得到定量，在特異性方面存在課題。在基于咔唑硫酸法及阿爾新藍(lán)比色法的定量中，也無(wú)法確認(rèn)樣品中所含的酸性粘多糖的種類。在非專利文獻(xiàn)1中，通過(guò)電泳分離多種酸性粘多糖，并用密度計(jì)測(cè)定膜上的條帶密度，但認(rèn)為在該條帶的密度測(cè)定中，健康食品等酸性粘多糖的定量很難以高精度來(lái)實(shí)施。

本發(fā)明的目的在于，提供可以簡(jiǎn)便的工序，實(shí)施含有酸性粘多糖或其鹽的樣品中所含的酸性粘多糖或其鹽的種類的確認(rèn)及定量的分析方法。