[發(fā)明專利]包含抗體的抗原結(jié)合區(qū)、融合生理活性肽的人工蛋白質(zhì)

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201980042908.X
• 申請日: 2019-05-10
• 公開（公告）號(hào): CN112313333A
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高木淳一;平井秀憲
• 申請（專利權(quán)）人: 秘來生物制劑株式會(huì)社
• 主分類號(hào): C12N15/09
• 分類號(hào): C12N15/09;C07K16/00;C07K19/00;C12P21/00;C12N15/62
• 代理公司: 北京市金杜律師事務(wù)所 11256
• 代理人: 焦成美

本發(fā)明提供將生理活性肽融合于下述部位的人工蛋白質(zhì)，所述部位是至少具有抗體的抗原結(jié)合區(qū)的蛋白質(zhì)中的存在于負(fù)責(zé)抗原結(jié)合活性的結(jié)構(gòu)區(qū)域內(nèi)的二級(jí)結(jié)構(gòu)的回折部分、且在蛋白質(zhì)的表面露出的部位。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及包含抗體的抗原結(jié)合區(qū)、融合生理活性肽的人工蛋白質(zhì)等。

背景技術(shù)

抗體的功能在本質(zhì)上是與作為靶分子的唯一一種抗原分子特異性地結(jié)合。作為通過蛋白質(zhì)工程方法得到的修飾抗體，識(shí)別二種以上不同抗原分子的抗體(多特異性抗體：MsAb)是已知的。

對于MsAb而言，一個(gè)抗體同時(shí)與二種以上的靶分子結(jié)合，因此，可用作將癌細(xì)胞和淋巴細(xì)胞這樣不同種類的細(xì)胞彼此橋連從而發(fā)揮抗癌作用的藥物。另外，通過向具有抗體固有的第一結(jié)合特異性的抗體賦予第二結(jié)合特異性，能夠使MsAb集聚于所期望的組織、細(xì)胞。因此，與使用了僅具有針對單一靶標(biāo)的結(jié)合能力·抑能力的通常的單克隆抗體的藥物相比，MsAb能夠介由更加復(fù)雜的作用機(jī)制控制病況，其作為下一代抗體藥物的主力而受到重視。

作為MsAb的形態(tài)，將二個(gè)抗原識(shí)別Fab區(qū)不同的抗體的衍生物組合的形態(tài)的雙特異性抗體(BsAb)是主流，但該IgG型的BsAb中，為了使來自不同抗體的重鏈進(jìn)行異源二聚體化，需要特殊的工程修飾(非專利文獻(xiàn)1)。為了避免異源二聚化中的問題點(diǎn)，通過在Fab區(qū)以外的位置Fc嵌入第二結(jié)合特異性來創(chuàng)造IgG型的BsAb的技術(shù)被稱為Fcab(非專利文獻(xiàn)2)。Fcab中，F(xiàn)ab區(qū)與原來的抗體相同，因此，抗體原本具有的第一結(jié)合特異性所涉及的性質(zhì)得到保持，并且單純地向其中添加被組入Fc的第二結(jié)合特異性。

然而，IgG型的BsAb均需要高度的工程修飾，并且由于是IgG型的高分子(分子量為15萬)，從這方面來看，也可知在開發(fā)、生產(chǎn)中困難較多。此外，這樣的IgG型的BsAb中，能賦予的新的結(jié)合特異性一般為一種。因此，沒有已實(shí)現(xiàn)賦予第三、第四結(jié)合特異性的實(shí)例。

針對這些IgG型的BsAb，開發(fā)了將二個(gè)抗體的Fv區(qū)以單鏈型scFv的狀態(tài)串聯(lián)式連接而成的BsAb，其被稱為串聯(lián)(tandem)scFv(taFv)，更為小型且容易進(jìn)行基因重組生產(chǎn)，被用作使淋巴細(xì)胞集聚于癌細(xì)胞并進(jìn)行攻擊的癌免疫療法藥(雙特異性T細(xì)胞銜接蛋白，Bispecific T-cell Engager；BiTE)(例如，參見專利文獻(xiàn)1)。但是，taFv是與天然的抗體結(jié)構(gòu)相差甚遠(yuǎn)的人造物，因此在生物體內(nèi)的穩(wěn)定性也低(非專利文獻(xiàn)3)。此外，雖然原理上能夠連接3個(gè)以上scFv，但可預(yù)期穩(wěn)定性會(huì)進(jìn)一步降低，因此目前特異性的添加限于2種。

另一方面，作為原來的抗體分子的一部分的Fab由VH、VL、CH1、CL這4個(gè)結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，一直以來作為通過木瓜蛋白酶等蛋白酶處理IgG而得到穩(wěn)定的抗原結(jié)合蛋白質(zhì)的形式被使用。Fab的抗原結(jié)合部位(被稱為互補(bǔ)性決定區(qū)，complementarity determiningregion；CDR)由在VH和VL的前端部各自呈遞的3個(gè)環(huán)區(qū)(loop region)、合計(jì)6個(gè)環(huán)構(gòu)成，因此，該前端部以外的區(qū)域存在工程修飾的余地。即，只要能夠?qū)DR以外的區(qū)域的氨基酸序列進(jìn)行修飾以創(chuàng)造出新的生理活性部位，即可向現(xiàn)有的抗體賦予第二靶標(biāo)結(jié)合性這樣的新型功能。然而，即使意圖將這些環(huán)區(qū)的氨基酸隨機(jī)化以賦予新的生理活性，由于通常會(huì)在結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性方面造成較大的損失，因此創(chuàng)造較之前述的Fcab、taFv而言更加困難。因此，迄今為止，向Fab區(qū)賦予了新的活性的例子僅已知將生理活性肽、小分子蛋白質(zhì)融合至輕鏈的C末端(專利文獻(xiàn)2)。

現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)1：日本特表2018-525347號(hào)公報(bào)

專利文獻(xiàn)2：日本特表2011-509084號(hào)公報(bào)

非專利文獻(xiàn)

非專利文獻(xiàn)1：Nature Biotechnology,1998；16：677-681