[發明專利]用于多核苷酸測序的組合物

在審

• 申請號: 201980042751.0
• 申請日: 2019-12-09
• 公開（公告）號: CN112639125A
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: P.加蒂-拉夫蘭科尼;H.桑索姆;M.漢科克
• 申請（專利權）人: 伊盧米納劍橋有限公司
• 主分類號: C12Q1/6869
• 分類號: C12Q1/6869
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 張文輝

1.多核苷酸測序方法，其包括：

(a)將封閉的、標記的核苷酸摻入與模板多核苷酸鏈的至少一部分互補的拷貝多核苷酸鏈中；

(b)在存在第一緩沖液組合物的情況下檢測所述封閉的、標記的核苷酸的身份；

(c)從摻入所述拷貝鏈中的所述封閉的、標記的核苷酸以化學方式去除標記物和封閉部分；

(d)用包含所述第一緩沖液組合物的洗滌溶液將所述以化學方式去除的標記物和封閉部分從所述拷貝鏈洗去，

其中所述第一緩沖液組合物包含抗氧化劑和清除劑化合物。

2.權利要求1的方法，其進一步包括重復步驟(a)至(d)，直到確定所述模板多核苷酸鏈的部分的序列。

3.權利要求1或2的方法，其中所述清除劑化合物包含二硫化物部分或疊氮化物部分。

4.權利要求3的方法，其中所述清除劑化合物包含二硫化物部分。

5.權利要求3的方法，其中所述清除劑化合物是硫辛酸或3,3’-二硫代二丙酸(DDPA)。

6.權利要求1至5中任一項的方法，其中從摻入拷貝多核苷酸鏈中的所述封閉的、標記的核苷酸去除所述標記物和所述封閉部分包括使所述拷貝鏈與三(羥甲基)膦接觸。

7.權利要求1至6中任一項的方法，其中所述第一緩沖液組合物包含選自由抗壞血酸鹽、香草乙酮和6-羥基-2,5,7,8-四甲基苯并二氫吡喃-2-羧酸組成的組的抗氧化劑。

8.權利要求1至7中任一項的方法，其中所述模板多核苷酸鏈附接至固體支持物。

9.權利要求8的方法，其中所述模板多核苷酸附接至流動池。

10.與測序裝置一起使用的盒(cartridge)，所述盒包含含有多個組合物的多個室，其中每個室含有單一組合物，其中所述組合物由以下組成：

(a)用于將封閉的、標記的核苷酸摻入與模板多核苷酸鏈的至少一部分互補的拷貝多核苷酸鏈中的試劑；

(b)包含抗氧化劑和清除劑的緩沖液組合物；

(c)用于從所述摻入拷貝鏈中的封閉的、標記的核苷酸以化學方式去除標記物和封閉部分的試劑；和

(d)洗滌緩沖液。

11.與測序裝置一起使用的試劑盒，所述試劑盒包含含有多個組合物的多個室，其中每個室含有單一組合物，其中所述組合物由以下組成：

(a)用于將封閉的、標記的核苷酸摻入與模板多核苷酸鏈的至少一部分互補的拷貝多核苷酸鏈中的試劑；

(b)包含抗氧化劑和清除劑的緩沖液組合物；

(c)用于從所述摻入拷貝鏈中的封閉的、標記的核苷酸以化學方式去除標記物和封閉部分的試劑；和

(d)洗滌緩沖液。

12.權利要求10的盒或權利要求12的試劑盒，其中所述清除劑包含二硫化物部分。

13.權利要求10的盒或權利要求11的試劑盒，其中所述清除劑是硫辛酸或3,3’-二硫代二丙酸(DDPA)。

14.多核苷酸測序方法，其包括：

從摻入與模板多核苷酸鏈的至少一部分互補的拷貝多核苷酸鏈中的封閉的、標記的核苷酸去除標記物和封閉部分；和

用包含3,3’-二硫代二丙酸(DDPA)的洗滌溶液將所述去除的標記物和封閉部分從所述拷貝鏈洗去。

15.權利要求14的方法，其進一步包括：

在以化學方式去除所述封閉的、標記的核苷酸之前，檢測摻入所述拷貝鏈中的所述封閉的、標記的核苷酸的身份，

其中檢測所述封閉的、標記的核苷酸的身份在存在所述第一緩沖液組合物的情況下進行。