[發明專利]從條件性重編程細胞獲得動物模型的方法以及該動物模型用于篩選抗腫瘤藥物的用途

在審

• 申請號: 201980039991.5
• 申請日: 2019-03-19
• 公開（公告）號: CN112334575A
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發明（設計）人: 聞丹憶
• 申請（專利權）人: 上海立迪生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12Q1/02;A61K49/00;C12R1/91
• 代理公司: 北京世峰知識產權代理有限公司 11713
• 代理人: 王思琪;王建秀

一種從條件性重編程腫瘤細胞獲得用于篩選抗腫瘤藥物的動物模型的方法以及使用該動物模型來篩選抗腫瘤藥物的方法。

技術領域

本發明涉及一種用于將從患者的腫瘤活檢樣本中獲得的原代腫瘤細胞在體內和體外條件下培養的組合物、一種將所獲得的原代腫瘤細胞在該組合物中培養的方法、一種使用該動物模型獲得用于篩選抗腫瘤藥效的動物模型的方法。

背景技術

條件性重編程(CR)是一種可用于快速有效地從正常細胞和患病細胞(包括腫瘤細胞)建立來源于患者的細胞培養物的細胞培養技術。CR的最大優勢在于其可以從患者組織樣本中快速有效地擴增細胞培養物。這使得研究者可以足夠快地篩選腫瘤對抗癌藥物或免疫療法的敏感性，從而提供臨床使用信息。

在動物模型中測試抗腫瘤藥物的功效是重要的，因為此類動物模型對于抗腫瘤藥物篩選是重要的。此類動物模型將模擬患者的體內環境，反映出患者的響應，因此更加有效。為了建立動物模型，本領域技術人員通常需要獲得數量足夠多的腫瘤細胞。然而，從患者獲得的腫瘤樣本可能包含非常少量或者甚至微量的腫瘤細胞，這取決于獲得它們的方式。例如，從穿刺活檢獲得的腫瘤樣本可能包含非常少量的腫瘤細胞，因此，本領域技術人員難以使用它們來建立用于篩選抗腫瘤藥物的所需動物模型。

通過條件性重編程而進行的腫瘤細胞永生化是針對基于細胞的診斷、藥敏實驗和體外生物樣本庫而產生培養腫瘤細胞的非常重要的工具。但是，如何有效且成功地培養從患者獲得的原代腫瘤細胞(特別是從例如穿刺活檢獲得少量或者甚至微量的細胞樣本)依然是一項挑戰。

發明內容

為了解決上述問題，對于來自多種腫瘤類型的原代腫瘤細胞，本發明人針對永生化成功地進行了條件性重編程，并使用經過條件性重編程的腫瘤細胞來建立用于測試抗腫瘤藥物的動物模型。原代腫瘤細胞從手術組織、活檢或穿刺活檢樣本中獲得。本發明中獲得的條件性重編程的原代腫瘤細胞顯示出典型的克隆樣生長，且在低溫凍存后保持良好。一些情況下，細胞可多次傳代，變成有用的細胞系。與原代腫瘤細胞一樣，條件性重編程的腫瘤細胞對于在體外測試藥物敏感性是可靠的。本發明人已經成功地將條件性重編程的腫瘤細胞(CRC)植入到用于測試藥效的動物模型中，并使用該動物模型來篩選抗腫瘤藥物。本發明還公開了條件性重編程的腫瘤細胞在藥效試驗中的用途。

本發明的一個方面提供了一種獲得用于篩選抗腫瘤藥物的動物模型的方法，其包括：

(1)在組合物中培養從患者的腫瘤活檢樣本獲得的原代腫瘤細胞，該組合物包含：

a)0.01-1.0mg/L氫化可的松；

b)1.0-10.0mg/L菊粉；

c)1.0-20.0μg/L霍亂毒素；

d)2.0-50.0mg/L腺嘌呤；

e)1.0-30.0μg/L EGF；

f)1.0-30.0μmol/L Y-27632；

g)青霉素/鏈霉素(Pen/Strep)；

h)2-20％FBS；

i)F12培養基；

j)高糖DMEM，以及可選地

k)非必需氨基酸溶液；

l)GlutaMAX補充劑；

(2)將步驟(1)中獲得的原代腫瘤細胞植入到動物中。在實施方案中，本發明方法的步驟(1)中的組合物包含：

a)0.3-0.5mg/L，優選0.4mg/L氫化可的松；

b)4-6mg/L，優選5mg/L菊粉；