[發明專利]產生核酸文庫的方法以及用于實踐所述方法的組合物和試劑盒

在審

• 申請號: 201980038046.3
• 申請日: 2019-06-05
• 公開（公告）號: CN112243462A
• 公開（公告）日: 2021-01-19
• 發明（設計）人: R·格林;J·卡普
• 申請（專利權）人: 加利福尼亞大學董事會
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806
• 代理公司: 北京龍雙利達知識產權代理有限公司 11329
• 代理人: 孫濤;肖鸝

1.一種產生核酸文庫的方法，所述方法包括：

使單鏈核酸(ssNA)與單鏈核酸結合蛋白(SSB)接觸，以產生SSB結合的ssNA；以及

將以下組合：

所述SSB結合的ssNA，

第一銜接子寡核苷酸，以及

第一夾板寡核苷酸，所述第一夾板寡核苷酸包括SSB結合的ssNA雜交區域和第一銜接子寡核苷酸雜交區域，

以形成包括以下的復合物：所述第一夾板寡核苷酸通過所述SSB結合的ssNA雜交區域與所述SSB結合的ssNA的末端區域雜交；并且所述第一夾板寡核苷酸通過所述第一銜接子寡核苷酸雜交區域與所述第一銜接子寡核苷酸雜交，使得所述第一銜接子寡核苷酸的端部與所述SSB結合的ssNA的所述末端區域的端部相鄰。

2.根據權利要求1所述的方法，其進一步包括共價連接所述第一銜接子寡核苷酸和所述SSB結合的ssNA的相鄰端部。

3.根據權利要求2所述的方法，其中接觸、組合和共價連接步驟的總持續時間為3小時或更短。

4.根據權利要求1到3中任一項所述的方法，其中所述復合物由80％或更多的所述ssNA與所述SSB接觸而形成。

5.根據權利要求1到4中任一項所述的方法，其中所述ssNA來自經降解核酸樣品。

6.根據權利要求5所述的方法，其中所述ssNA來自古老(ancient)核酸樣品。

7.根據權利要求1到6中任一項所述的方法，其中所述ssNA來自法醫核酸樣品。

8.根據權利要求1到7中任一項所述的方法，其中所述ssNA為單鏈DNA(ssDNA)。

9.根據權利要求8所述的方法，其中所述ssDNA衍生自雙鏈DNA(dsDNA)。

10.根據權利要求9所述的方法，其進一步包括在使所述ssDNA與SSB接觸之前，通過使所述dsDNA變性來產生所述ssDNA。

11.根據權利要求9或權利要求10所述的方法，其進一步包括在形成所述復合物之后，使所述ssDNA再雜交以產生dsDNA。

12.根據權利要求11所述的方法，其進一步包括對所產生dsDNA進行測序。

13.根據權利要求12所述的方法，其中對所產生dsDNA的子樣品進行測序。

14.根據權利要求1到6中任一項所述的方法，其中所述ssNA為單鏈RNA(ssRNA)。

15.根據權利要求1到14中任一項所述的方法，其中所述組合包括：

將以下組合：

復合物，所述復合物包括所述第一夾板寡核苷酸通過所述第一銜接子寡核苷酸雜交區域與所述第一銜接子寡核苷酸雜交；以及

所述SSB結合的ssNA。

16.根據權利要求1到14中任一項所述的方法，其中所述組合包括：

將以下組合：

復合物，所述復合物包括所述第一夾板寡核苷酸通過所述SSB結合的ssNA雜交區域與所述SSB結合的ssNA雜交；以及

所述第一銜接子寡核苷酸。