[發明專利]來源于多能干細胞的結膜細胞的誘導方法

在審

• 申請號: 201980034709.4
• 申請日: 2019-05-22
• 公開（公告）號: CN112189049A
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發明（設計）人: 西田幸二;林龍平;能美君人
• 申請（專利權）人: 國立大學法人大阪大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N5/074;C12Q1/02
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 張晶;謝順星

本發明提供一種結膜上皮細胞、結膜杯狀細胞以及結膜上皮干/祖細胞的誘導方法，其特征在于，使用含有EGF(表皮生長因子)信號轉導活化因子的培養基培養多能干細胞的集落，并誘導分化。通過本發明，能夠由包括iPS細胞的多能干細胞誘導為結膜上皮細胞、結膜杯狀細胞、結膜上皮干/祖細胞，因此對結膜上皮細胞、結膜杯狀細胞的基礎研究、難治性眼表疾病的再生醫療或所述疾病相關的研究等方面極為有用。

技術領域

本發明涉及一種來源于多能干細胞的結膜細胞的誘導方法。更詳細而言，涉及一種由多能干細胞誘導為結膜細胞的方法及其利用。

背景技術

眼表面覆蓋有結膜上皮及角膜上皮，結膜上皮具有向淚液中分泌黏蛋白、眼表面的屏障功能等作用，角膜上皮具有光的透射/折射、保護眼球等作用。即，在眼表面的穩態維持中，結膜上皮和角膜上皮均發揮著不可欠缺的重要作用。

對人角膜上皮的研究比較有進展，例如本申請的發明人報道了，作為角膜上皮干細胞衰竭癥等重度角膜疾病的新型治療方法，開發了一種由iPS細胞制備角膜上皮細胞片(cell sheet)的技術，并使用動物模型確認了其有效性等(參考專利文獻1、非專利文獻1、2)。

然而，對于人結膜上皮，還有很多不清楚的地方。作為其理由，可列舉出難以獲得人結膜上皮、及結膜上皮在體外培養困難的點。

另一方面，報道了生物體中的結膜上皮由結膜上皮細胞及結膜杯狀細胞構成，這些細胞由存在于基底部的結膜上皮干/祖細胞分化而成(非專利文獻3)。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：WO2016/114285號

非專利文獻

非專利文獻1：Hayashietal.,NatureProtocols,2017,12(4),683-696,doi:10.1038/nprot.2017.007

非專利文獻2：Hayashietal.,Nature.2016Mar17,531,376-80,doi:10.1038/nature17000

非專利文獻3：Gipson.I.K.,Progress in Retinal and Eye Research,2016,54,49-63

發明內容

本發明要解決的技術問題

然而，由結膜上皮干/祖細胞分化為兩種細胞(結膜上皮細胞及結膜杯狀細胞)的詳細機理尚未解明，且能夠維持這兩種細胞(特別是結膜杯狀細胞)的培養方法也尚未建立。

目前，由于使用了人源細胞的研究較為困難，因此結膜上皮相關的研究不得不依賴于動物實驗。然而，由于小鼠或兔的結膜上皮與人的結膜上皮的性狀的差異較大，因此難以將由動物得到的結果直接推導于人。并且，在實際的醫療環境中，由結膜杯狀細胞的減少引起的黏蛋白缺乏型干眼癥也在近年來成為問題，但有效的治療藥有限。因此，結膜上皮相關的研究受到了基礎研究以及臨床研究這兩者的關注。

本發明涉及一種可適用于再生醫療等的來源于多能干細胞的結膜細胞的誘導方法及其利用。

解決技術問題的技術手段

本申請的發明人為了解決上述技術問題進行了認真研究，其結果，在形成按照非專利文獻1中記載的方法而得到的同心圓狀的帶狀結構(自我形成的外胚層自主性多區，aself-formed ectodermal autonomous multi-zone：SEAM)時，通過在特定的條件下進行培養，首次成功地以結膜上皮細胞、結膜杯狀細胞以及結膜上皮干/祖細胞占優勢的狀態進行了誘導分化，從而完成了本發明。