[發明專利]控制糖蛋白組合物去巖藻糖基化水平的方法

在審

• 申請號: 201980034368.0
• 申請日: 2019-05-23
• 公開（公告）號: CN112272708A
• 公開（公告）日: 2021-01-26
• 發明（設計）人: M·喬丹;H·布羅利;M·斯泰特勒;E·查波泰蘭德
• 申請（專利權）人: 阿雷斯貿易股份有限公司
• 主分類號: C12P21/00
• 分類號: C12P21/00;C07K16/24
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 余穎;楊昀

本發明涉及控制糖蛋白組合物去巖藻糖基化水平的方法。本方法包括通過選擇合適的溫度和/或pH來控制去巖藻糖基化水平。本發明還涉及根據本發明方法產生的糖蛋白組合物。

技術領域

本發明涉及調控糖蛋白組合物中去巖藻糖基化種類比例的方法，還涉及通過本發明方法獲得的組合物。

背景

在蛋白質表達期間，其通常會經歷翻譯后修飾，這些修飾包括糖部分的附連。此類糖基化對于蛋白質的生物學活性可具有深遠的影響。例如，抗體依賴性細胞毒性(ADCC)是許多治療性抗體的重要作用機理，該毒性依賴于抗體的巖藻糖基化水平。

具體而言，已發現巖藻糖基化量降低的單克隆抗體相較于其巖藻糖基化的對應抗體而言具有更高的ADCC。

需要控制糖蛋白組合物中的翻譯后修飾，例如控制去巖藻糖基化水平。

發明內容

本發明人已發現通過改變溫度和/或pH能夠受控地調控蛋白質去巖藻糖基化水平。

具體而言，本公開涉及如下內容：

1.根據(A)或(B)控制糖蛋白組合物去巖藻糖基化水平的方法：

(A)一種相較于糖蛋白組合物的參比去巖藻糖基化水平提高該糖蛋白組合物的去巖藻糖基化水平的方法，

其中，所述方法包括：在一定溫度和/或pH下培養表達糖蛋白的真核細胞，所述溫度和/或pH低于培養表達其去巖藻糖基化水平為參比去巖藻糖基化水平的糖蛋白的所述細胞所用的pH和/或溫度；或者

(B)一種相較于糖蛋白組合物的參比去巖藻糖基化水平降低該糖蛋白組合物的去巖藻糖基化水平的方法，

其中，所述方法包括：在一定溫度和/或pH下培養表達糖蛋白的真核細胞，所述溫度和/或pH高于培養表達其去巖藻糖基化水平為參比去巖藻糖基化水平的糖蛋白的所述細胞所用的pH和/或溫度。

2.如項目1所述的方法，其中，僅溫度(A)低于或(B)高于培養表達其去巖藻糖基化水平為參比去巖藻糖基化水平的糖蛋白的所述細胞所用的溫度。

3.如項目1所述的方法，其中，僅pH(A)低于或(B)高于培養表達其去巖藻糖基化水平為參比去巖藻糖基化水平的糖蛋白的所述細胞所用的pH。

4.如項目1所述的方法，其中，溫度和pH均(A)低于或(B)高于培養表達其去巖藻糖基化水平為參比去巖藻糖基化水平的糖蛋白的所述細胞所用的pH和溫度。

5.如項目1-4中任一項所述的方法，其中，所述真核細胞為哺乳動物細胞。

6.如項目5所述的方法，其中，所述哺乳動物細胞為CHO細胞。

7.如項目1-6中任一項所述的方法，其中，所述糖蛋白為抗體或抗體片段。

8.如項目1-7中任一項所述的方法，其中，pH和/或溫度的變化限于生產階段。

9.可通過項目1-8中任一項所述的方法獲得的糖蛋白組合物。

10.一種試劑盒，其包含項目9所述的糖蛋白組合物和使用說明書。

就本發明任何具體方面而言的任何特征(包括可選的、適宜的和優選的特征)也可為就本發明其他方面而言的特征(包括可選的、適宜的和優選的特征)。

附圖說明

圖1顯示了pH和溫度對總去巖藻糖基化聚糖的水平(＝A0+A1+A2+M4+M5+M6+M7+M8)的組合作用。所指示的pH是指用于培養第5天和第17天之間的pH上限。

圖2顯示了pH和溫度對總高甘露糖聚糖的水平(＝M4+M5+M6+M7+M8)的組合作用。