[發(fā)明專利]嵌合抗原受體的腫瘤環(huán)境特異性表達

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201980025929.0
• 申請日: 2019-02-14
• 公開（公告）號: CN111971394A
• 公開（公告）日: 2020-11-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: A·波加多;羅伊·加齊特
• 申請（專利權(quán)）人: 內(nèi)蓋夫生物技術(shù)國家研究所有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/86;C12N15/867;A61K35/17;A61K48/00
• 代理公司: 北京安信方達知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11262
• 代理人: 王瑋瑋;鄭霞

1.一種腫瘤微環(huán)境(TME)響應(yīng)性表達載體，所述腫瘤微環(huán)境(TME)響應(yīng)性表達載體包含：

編碼合成的啟動子的核酸序列，所述啟動子包含一個或更多個TME依賴性啟動子響應(yīng)元件(PRE)；和編碼效應(yīng)物基因的核酸序列；其中所述TME響應(yīng)性表達載體被設(shè)計成使得TME中存在的一種或更多種TME因子與所述啟動子響應(yīng)元件的結(jié)合誘導(dǎo)所述效應(yīng)物基因的表達，并且其中在所述一種或更多種TME因子與所述啟動子響應(yīng)元件的結(jié)合不存在的情況下，低的效應(yīng)物基因被表達或基本上沒有效應(yīng)物基因被表達。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的TME響應(yīng)性表達載體，其中所述TME依賴性PRE包括選自由以下組成的列表的一個或更多個序列元件：在炎性TME中活化的干擾素-γ(IFN-γ)PRE、TNF-αPRE、核因子κ-B(NF-κB)PRE、低氧PRE、熱休克蛋白70(HSP-70)PRE、IL-6PRE、TGF-βPRE、IL-1PRE、IL-8PRE、IL-11PRE、IL-12PRE、IL-15PRE、IL-18PRE、IL-17PRE、IL-21PRE、IL-35PRE、GM-CSF PRE、肝生長因子(HGF)PRE、芳基氫受體(AhR)PRE或其任何組合。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的TME響應(yīng)性表達載體，其中所述效應(yīng)物基因是嵌合抗原受體(CAR)。

4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的TME響應(yīng)性表達載體，其中所述啟動子響應(yīng)元件包含與選自SEQ ID No 1-40中列出的核酸序列的核酸具有至少80％序列同源性的核酸序列或其任何組合。

5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的TME響應(yīng)性表達載體，其中所述啟動子響應(yīng)元件包含與選自SEQ ID No 1-4中列出的核酸序列的核酸序列具有至少80％序列同源性的核酸序列。

6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的TME響應(yīng)性表達載體，其中所述啟動子響應(yīng)元件包含與選自SEQ ID No 22-40中列出的核酸序列的核酸序列具有至少80％序列同源性的核酸序列或其任何組合。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的TME響應(yīng)性表達載體，其中所述啟動子響應(yīng)元件包含與SEQ IDNO:41中列出的核酸具有至少80％序列同源性的核酸序列。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項所述的TME響應(yīng)性表達載體，其中所述啟動子響應(yīng)元件包含兩個或更多個啟動子響應(yīng)元件；并且其中所述一種或更多種TME因子與所述兩個或更多個TME依賴性啟動子響應(yīng)元件的結(jié)合比當(dāng)與單一TME依賴性啟動子響應(yīng)元件結(jié)合時誘導(dǎo)更高的CAR表達水平。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項所述的TME響應(yīng)性表達載體，所述TME響應(yīng)性表達載體還包含外部誘導(dǎo)型啟動子和反式激活因子；其中所述合成的啟動子驅(qū)動所述反式激活因子的表達，并且其中所述外部誘導(dǎo)型啟動子驅(qū)動所述CAR的表達；并且其中誘導(dǎo)物和所述TME因子的組合存在誘導(dǎo)CAR的表達。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的TME響應(yīng)性表達載體，其中，在外部誘導(dǎo)物存在且所述TME因子不存在的情況下，基本上沒有檢測到CAR表達。

11.根據(jù)權(quán)利要求9或10所述的TME響應(yīng)性表達載體，其中，當(dāng)所述TME因子在外部誘導(dǎo)物不存在的情況下結(jié)合所述啟動子響應(yīng)元件時，基本上沒有檢測到CAR表達。

12.根據(jù)權(quán)利要求9-11中任一項所述的TME響應(yīng)性表達載體，其中所述外部誘導(dǎo)型啟動子是Tet響應(yīng)元件啟動子，并且外部誘導(dǎo)物是多西環(huán)素和/或四環(huán)素，并且其中所述Tet響應(yīng)元件通過所述反式激活因子和多西環(huán)素和/或四環(huán)素的組合存在而被活化。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的TME響應(yīng)性表達載體，其中所述反式激活因子是rtTA3。