[發明專利]含細胞外基質的組合物、三維組織體形成用臨時支架材料及三維組織體形成劑以及從三維組織體中回收細胞的方法

在審

• 申請號: 201980021490.4
• 申請日: 2019-05-07
• 公開（公告）號: CN112041332A
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發明（設計）人: 北野史朗;入江新司;松崎典彌
• 申請（專利權）人: 凸版印刷株式會社;國立大學法人大阪大學
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C12N5/071
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 王靈菇

本發明涉及含細胞外基質的組合物、三維組織體形成用臨時支架材料及三維組織體形成劑以及從三維組織體中回收細胞的方法。所述含細胞外基質的組合物包含片段化的細胞外基質成分和水性介質。

技術領域

本發明涉及含細胞外基質的組合物、三維組織體形成用臨時支架材料及三維組織體形成劑。本發明還涉及從三維組織體中回收細胞的方法。

背景技術

近年來，開發了在生物體外構建細胞的三維組織體的技術。例如，提出了通過培養將培養細胞的表面整體用粘附膜包覆的包覆細胞來制造三維組織體的方法(專利文獻1)、在以聚乳酸等為材料的支架上播種細胞來制造三維組織體的方法(非專利文獻1)等。另外，本發明者們迄今為止提出了如下方法等：一種制造三維組織體的方法(專利文獻2)，其包含：將用包含膠原成分、纖連蛋白成分等細胞外基質成分的被膜涂布的細胞三維地配置而形成三維組織體；一種三維組織體的制造方法(專利文獻3)，其包含：形成在細胞的表面形成有被膜的包覆細胞、和將包覆細胞三維地配置，其中，包覆細胞的形成包含：使細胞浸漬于含有被膜成分的液體中、和利用透液性膜將所浸漬的細胞和含有被膜成分的液體分離。這樣的三維組織體期待作為實驗動物的替代品、移植材料等的用途。

在細胞三維培養的方法中，研究了如上述那樣使用能夠粘附細胞的支架材料的方法、不使用支架材料而使細胞層疊的方法等各種方法，但在任一細胞培養方法中，一般都是在膠原成分等細胞外基質成分的共存化下與細胞一起培養。這是因為，除了細胞外基質成分被認為作為在細胞間質中物理性地支撐組織結構的材料起作用以外，在細胞的產生、分化、形態形成等方面也承擔生物學上的重要作用。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：日本特開2012-115254號公報

專利文獻2：國際公開第2015/072164號

專利文獻3：國際公開第2016/027853號

專利文獻4：日本專利6029102號公報

專利文獻5：日本專利5870408號公報

非專利文獻

非專利文獻1：Nature Biotechnology,2005,Vol.23,NO.7,p.879-884

發明內容

發明所要解決的課題

在從外部供給細胞外基質成分來培養細胞的情況下，所構建的三維組織體中必然包含從外部供給的細胞外基質成分(外源性細胞外基質成分)。使外源性細胞外基質成分與細胞共存，在體外(in vitro)進行細胞的三維培養的階段，具有有用的方面，但另一方面在對所構建的三維組織體進行各種分析、解析、評價等的階段，如果是自然的狀態，則本來不存在的外源性細胞外基質成分有可能對三維組織體本來的功能造成影響。

作為避免這樣的影響的方法，例如考慮在三維組織體形成后，僅將外源性成分除去的方法。例如，專利文獻4中使用了顯示在25℃以上的溫度下成為凝膠狀態且在0℃以上且15℃以下的溫度下成為溶膠狀態的熱可逆性的溶膠-凝膠轉變的載體材料。專利文獻4中進行如下方法：在凝膠化的載體材料上形成三維組織體，然后，通過冷卻該載體材料使其溶膠化，除去溶膠化的載體材料，由此回收三維組織體。

然而，專利文獻4的方法中，由于是人工制作出顯示熱可逆性的溶膠-凝膠轉變的載體材料的材料，因此擔心在培養過程中會對三維組織體造成影響。此外，專利文獻4中另行投入有膠原成分作為外源性細胞外基質成分，因此所回收的三維組織體中仍然含有外源性細胞外基質成分。

另外，例如在投入有膠原成分作為外源性的細胞外基質成分的情況下，如果為了分解膠原而利用膠原酶進行處理，則能夠溶解外源性的膠原成分，但有可能對基于細胞自身以及由該細胞分泌的內源性的膠原成分的組織結構造成損傷。