[發(fā)明專利]用于基因療法的修飾的rAAV衣殼蛋白

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201980020100.1
• 申請日: 2019-01-17
• 公開（公告）號: CN112004544A
• 公開（公告）日: 2020-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: J·D·芬;D·格林;K·貝爾納;S·A·斯內(nèi)克;N·布雷克斯特拉;S·M·G·范德桑登
• 申請（專利權(quán)）人: 梅里特斯英國第二有限公司;海德堡大學(xué)
• 主分類號: A61K35/76
• 分類號: A61K35/76;A61P19/02;A61P29/00;C12N15/68
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 羅文鋒;黃希貴

本發(fā)明涉及用于基因療法的重組的腺相關(guān)病毒(rAAV)病毒體，其中所述rAAV病毒體包含新型衣殼蛋白。具體地，本發(fā)明涉及此類病毒體在基因療法中用于治療關(guān)節(jié)炎疾病諸如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或其癥狀的用途，優(yōu)選地通過關(guān)節(jié)內(nèi)施用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基于重組的腺相關(guān)病毒(rAAV)的基因療法的領(lǐng)域，具體地涉及突變衣殼rAAV在治療或預(yù)防關(guān)節(jié)炎疾病中的用途。

背景技術(shù)

重組的腺相關(guān)病毒(rAAV)載體已經(jīng)展示出在人體內(nèi)遞送基因的優(yōu)異的安全性和功效特征。因此，rAAV載體廣泛用于體內(nèi)基因療法并顯示對臨床前模型以及臨床試驗安全有效。rAAV載體已在一系列疾病的多種基因療法臨床試驗中取得成功，所述疾病包括血友病B、血友病A、囊腫性纖維化、α-1抗胰蛋白酶缺乏癥、脊髓性肌萎縮(SMA)、帕金森病、杜興氏肌肉營養(yǎng)不良癥和萊伯氏先天性黑蒙癥(Selot等人,Current PharmaceuticalBiotechnology,2013,14,1072-1082)。阿利潑金(Alipogene tiparvovec)(uniQure)作為治療脂蛋白脂肪酶缺乏癥(LPLD)的基因療法已在歐洲獲得銷售許可。隨后，對治療皮膚癌的基于皰疹病毒的Talimogene laherparepvec(T-Vec，Amgen)和治療ADA-SCID(GSK)的基于離體干細(xì)胞逆轉(zhuǎn)錄病毒的基因療法Strimvelis授予了基因療法藥物許可。

基于rAAV載體的基因療法也應(yīng)用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)中，這是影響～1％人群的慢性炎性疾病。RA病理遍布滑膜關(guān)節(jié)。關(guān)節(jié)的局部性質(zhì)使得體內(nèi)基因療法非常有吸引力。已應(yīng)用了提供抗炎蛋白的療法，旨在使RA平衡向抗炎狀態(tài)偏移。

許多工作把重點(diǎn)放在了開發(fā)具有期望特性的AAV衣殼蛋白上。此類特性可以包括更高的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率、組織/器官趨性、非期望組織/器官的脫靶，或預(yù)先存在的中和抗體的避免。

然而，在本領(lǐng)域中仍然需要進(jìn)一步改善rAAV基因療法載體。具體地，需要改善rAAV基因療法載體在關(guān)節(jié)炎疾病中的使用，并且更精確地，需要改善向靶向組織，諸如滑膜關(guān)節(jié)或滑膜關(guān)節(jié)內(nèi)的特定細(xì)胞類型，優(yōu)選地成纖維樣滑膜細(xì)胞(FLS)遞送遺傳物質(zhì)的效率。

發(fā)明內(nèi)容

在第一方面，本發(fā)明涉及一種用于治療或預(yù)防關(guān)節(jié)炎疾病或用于治療或預(yù)防與關(guān)節(jié)炎疾病相關(guān)的癥狀的包含修飾的衣殼蛋白的重組的腺相關(guān)病毒(rAAV)病毒體，其中修飾的衣殼蛋白在所述蛋白質(zhì)的C末端部分中包含氨基酸序列Z，所述氨基酸序列Z的殘基暴露在衣殼蛋白的表面上。優(yōu)選地，氨基酸序列Z：

包含下式I的氨基酸殘基的序列或由其組成：

y–G–Q–x–G–(x)₃–R–(x)₃–y–A–Q–A–A

其中x表示單個氨基酸殘基或其中y表示0、1或2個氨基酸殘基，并且

存在于與野生型AAV衣殼蛋白的從C末端起第100–200位，優(yōu)選地第120–180位，更優(yōu)選地第130–170位，更優(yōu)選地第140–160位氨基酸殘基相對應(yīng)的位置處。

優(yōu)選地，式I的氨基酸殘基暴露在衣殼蛋白的表面上。在一個優(yōu)選實施方案中，序列Z在修飾的衣殼蛋白中被包含在由下式II表示的位置處：

EEEIxxxxPVATExxGxxxxNxQy–Z–(x)_nLPGMVWQxRDVYLQGPIWAKIPHTDG

其中Z、x和y如上文所定義；并且其中n為5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15。