[發(fā)明專利]作為治療性單克隆抗體上的新酸性翻譯后修飾的葡糖醛酸化在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201980018896.7 | 申請日： | 2019-01-29 |
| 公開（公告）號： | CN112135839A | 公開（公告）日： | 2020-12-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王順海 | 申請（專利權(quán)）人： | 瑞澤恩制藥公司 |
| 主分類號： | C07K16/00 | 分類號： | C07K16/00;G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京市君合律師事務所 11517 | 代理人： | 吳瑜;孫倩 |
| 地址： | 美國*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 作為 治療 單克隆抗體 酸性 翻譯 修飾 葡糖 醛酸 | ||
提供了用于鑒定葡糖醛酸化的蛋白質(zhì)藥品的組合物和方法。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明大體上涉及鑒定治療蛋白上的翻譯后修飾的系統(tǒng)和方法。
背景技術(shù)
在制藥行業(yè)中，重組單克隆抗體(recombinant monoclonal antibody；mAb)構(gòu)成蛋白質(zhì)療法的主要類別。mAb結(jié)構(gòu)的變化可能影響治療功效、生物利用度和清除率以及治療性mAb的免疫原性特性。另外，mAb中的變化可以改變藥物安全性和功效。mAb的一級結(jié)構(gòu)、翻譯后修飾(PTM)和二硫鍵的綜合特征對于藥物功效和安全性的評估以及理解結(jié)構(gòu)/功能關(guān)系至關(guān)重要。
在用于確保產(chǎn)品和工藝一致性的各種分析中，離子交換色譜法(IEX)是分析mAb分子的電荷異質(zhì)性的常用技術(shù)。mAb電荷變異體可能常常歸因于可以改變mAb分子的表面電荷的翻譯后修飾(PTM)。由于不斷改進的LC-MS技術(shù)，已經(jīng)鑒定出許多已知的或新穎的PTM。另外，已闡明其對電荷異質(zhì)性的貢獻。雖然技術(shù)的進步提供了許多新穎PTM，但仍然需要進一步表征和發(fā)現(xiàn)改變mAb活性和穩(wěn)定性的PTM。
因此，本發(fā)明的目標是提供用于鑒定PTM的系統(tǒng)和方法。
發(fā)明內(nèi)容
提供了用于鑒定葡糖醛酸化的蛋白質(zhì)藥品的組合物和方法。一個實施例提供了一種通過使蛋白質(zhì)藥品脫糖基化并用酶(例如)來處理脫糖基化蛋白質(zhì)藥品以產(chǎn)生一個Fc*片段(通過非共價相互作用結(jié)合在一起的兩個相同的Fc/2片段)和一個Fab2來鑒定蛋白質(zhì)藥品的葡糖醛酸化的方法。隨后將Fc*和Fab2片段分離成Fc*和Fab2的酸性洗脫份。在一個實施例中，使用離子交換色譜，例如強陽離子交換色譜分離Fc*和Fab2片段。分離后，收集、干燥并使所述酸性洗脫份變性。將經(jīng)干燥和變性的酸性洗脫份烷基化，并且隨后用胰蛋白酶消化以形成樣品。隨后用NaBH4處理樣品以形成還原樣品。隨后對還原Fc*和還原Fab2樣品兩者進行反相液相色譜/質(zhì)譜分析，以鑒定蛋白質(zhì)藥品的葡糖醛酸化。在一個實施例中，所述方法包含以下步驟：比較還原樣品與未還原樣品之間的質(zhì)譜結(jié)果以鑒定還原樣品與未還原樣品之間的質(zhì)量差。藥品可以是單克隆抗體或融合蛋白。在一個實施例中，在蛋白質(zhì)藥品的賴氨酸殘基上檢測到葡糖醛酸化。
在一個實施例中，使用在名稱下出售的來自釀膿鏈球菌(Streptocoocus pyogenes)的IdeS的重組修飾形式來形成Fc*和Fab2片段。
所公開的方法可以用于監(jiān)測蛋白質(zhì)藥品(例如單克隆抗體或其它治療蛋白)的純度。一個實施例提供了一種用于通過以下來提高蛋白質(zhì)藥品的純度的方法：分析蛋白質(zhì)藥品以鑒定蛋白質(zhì)藥品的一個或多個氨基酸的伯胺上的葡糖醛酸化，并且從所述蛋白質(zhì)藥品去除葡糖醛酸化的蛋白質(zhì)以產(chǎn)生純化蛋白質(zhì)藥品。可以使用上文和實例中所描述的方法來檢測葡糖醛酸化。在一個實施例，葡糖醛酸化的蛋白質(zhì)通過任選地與質(zhì)譜耦接的高效液相色譜技術(shù)來檢測。代表性色譜技術(shù)包含但不限于尺寸排阻色譜法、離子交換色譜法、親和色譜法、高效液相色譜法、超高效液相色譜法和其組合。通常，葡糖醛酸化在蛋白質(zhì)藥品的賴氨酸殘基上發(fā)生。
另一個實施例提供了一種用于通過以下來鑒定翻譯后修飾的蛋白質(zhì)藥品的方法：分析從哺乳動物細胞培養(yǎng)物獲得的蛋白質(zhì)藥品的葡糖醛酸化，其中蛋白質(zhì)藥品的葡糖醛酸化的存在表明蛋白質(zhì)藥品包括翻譯后修飾。所述哺乳動物細胞培養(yǎng)物通常含有中國倉鼠卵巢細胞(Chinese Hamster Ovary cell)。
再另一個實施例提供了一種含有治療蛋白的蛋白質(zhì)藥品，其中低于1.0％、2.0％、3.0％、4.0％、5.0％、6.0％、7.0％、8.0％、9.0％或10％的治療蛋白的氨基酸是葡糖醛酸化的。在一個實施例中，氨基酸為賴氨酸。通常，治療蛋白是單克隆抗體、重組蛋白或融合蛋白。
附圖說明
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