[發明專利]源自干細胞的淚腺組織的制作方法

有效

• 申請號: 201980018449.1
• 申請日: 2019-03-28
• 公開（公告）號: CN111836884B
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發明（設計）人: 西田幸二;林龍平;大久保徹;本間陽一
• 申請（專利權）人: 國立大學法人大阪大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;A61K35/30;A61K35/545;A61P27/02;A61P27/04;C12N5/10;C12Q1/02
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司 11219
• 代理人: 魯雯雯;金龍河

一種源自干細胞的淚腺組織的制作方法，其特征在于，從由多能干細胞得到的SEAM細胞群(自我形成的外胚層自主性多區細胞群)中分離出SSEA4和CD104雙陽性細胞，將所得到的細胞在含有EGF(表皮生長因子)和ROCK抑制劑的培養基中進行三維培養，由此獲得表達淚腺的相關蛋白的細胞群。通過本發明，能夠由包括iPS細胞的多能干細胞制造淚腺類器官，因此對于利用細胞醫療進行的淚腺相關疾病的再生治療和與上述疾病相關的研究極其有用。

技術領域

本發明涉及源自干細胞的淚腺組織的制作方法。更詳細而言，涉及由多能干細胞、角膜緣干細胞誘導淚腺組織的方法及其應用。

背景技術

人ES細胞、人iPS細胞等人多能干細胞在再生醫療中的應用在世界范圍內受到關注。為了將人多能干細胞應用于再生醫療，需要開發出將這些干細胞以高效率穩定地分化誘導為體細胞的技術，對于從人多能干細胞向任意體細胞的選擇性分化誘導方法進行了各種研究。

例如，非專利文獻1中公開了向人ES細胞中導入在淚腺上皮細胞中豐富存在的轉錄因子(PAX6、SIX1、FOXC1)而分化誘導淚腺上皮細胞的方法。

另外，作為針對角膜上皮干細胞缺乏癥等嚴重角膜疾病的新型治療法，本申請的發明人開發了由iPS細胞制作角膜上皮細胞片的技術，并報道了使用動物模型確認了其有效性等的情況(參考專利文獻1、非專利文獻2、3)。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：WO2016/114285號

非專利文獻

非專利文獻1：Hirayama?et?al.,Npj?Aging?and?Mechanisms?of?Disease,3(1),2017

非專利文獻2：Hayashi?et?al.,Nature?Protocols,2017,12(4),683-696,doi:10.1038/nprot.2017.007

非專利文獻3：Hayashi?et?al.,Nature.2016Mar?17,531,376-80,doi:10.1038/nature17000

發明內容

發明所要解決的問題

但是，即使依照現有技術能夠分化誘導出淚腺上皮細胞，但為了將其應用于再生醫療，也需要由該淚腺上皮細胞形成淚腺組織特征性的由導管細胞、腺泡細胞、肌上皮細胞這三種細胞構成的三維立體結構，從而形成能夠在神經系統的控制下分泌含有各種功能性成分的淚液的淚腺組織，但這在現階段尚未得以實現。

本發明涉及能夠應用于再生醫療等的源自干細胞的淚腺組織的制作方法及其應用。

用于解決問題的方法

本發明人為了解決上述課題進行了深入研究，結果發現，利用FACS從按照非專利文獻2中記載的方法得到的同心圓狀的帶狀結構(自我形成的外胚層自主性多區：a?self-formed?ectodermal?autonomous?multi-zone；SEAM)中分離特定的細胞，使用基質膠(Matrigel)并組合各種生長因子進行三維誘導，由此首次能夠在體外制作表達淚腺相關蛋白的淚腺樣組織。

即，本發明涉及以下的[1]～[7]。

[1]一種源自干細胞的淚腺組織的制作方法，其特征在于，從由多能干細胞得到的SEAM細胞群(自我形成的外胚層自主性多區細胞群)中分離出SSEA4和CD104雙陽性細胞，將所得到的細胞在含有EGF(表皮生長因子，Epidermal?Growth?Factor)和ROCK抑制劑的培養基中進行三維培養，由此獲得表達淚腺的相關蛋白的細胞群。

[2]如上述[1]所述的制作方法，其中，分離出的細胞進一步為CD200陰性。