[發明專利]用于使用微生物檢測蛋白檢測微生物的方法以及細胞結合組分的其他應用

在審

• 申請號: 201980018109.9
• 申請日: 2019-03-11
• 公開（公告）號: CN112740041A
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發明（設計）人: S·埃里克森;J·S·吉爾;M·M·B·阮;D·L·安德森;W·哈恩;J·鮑爾森
• 申請（專利權）人: 美國控股實驗室公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;C12N1/02;C12N9/50
• 代理公司: 中國貿促會專利商標事務所有限公司 11038
• 代理人: 李程達

1.一種捕獲和檢測樣品中少至單個感興趣的微生物的方法，其包括以下步驟：

將所述樣品與結合所述感興趣的微生物的多個微生物檢測探針(MDP)在使得所述微生物結合所述多個MDP的條件下孵育，其中所述MDP包括指示部分和細胞結合組分(CBC)；

將未結合的MDP與細胞結合的MDP分開；和

檢測在所述細胞結合的MDP上的指示部分，其中所述指示部分的陽性檢測指示所述感興趣的微生物存在于所述樣品中。

2.權利要求1所述的方法，其中與所述單個微生物結合的所述多個MDP為至少1×10⁶個。

3.權利要求1所述的方法，其中所述CBC對革蘭氏陰性細菌具有特異性。

4.權利要求1所述的方法，其中所述CBC對革蘭氏陽性細菌具有特異性。

5.權利要求3所述的方法，其中所述革蘭氏陰性細菌是沙門氏菌屬物種(Salmonellaspp)或大腸桿菌(E.coli)O157:H7。

6.權利要求4所述的方法，其中所述革蘭氏陽性細菌是李斯特氏菌屬物種(Listeriaspp)或葡萄球菌屬物種(Staphylococcus spp)。

7.權利要求1所述的方法，其中所述CBC是從對所述感興趣的微生物具有特異性的內溶素或spanin或受體結合蛋白(RBP)中分離的。

8.權利要求7所述的方法，其中所述spanin是外膜spanin(RZ1)或其截短的變體。

9.權利要求7所述的方法，其中所述RBP是尾絲蛋白或其截短的變體。

10.權利要求1所述的方法，其中所述CBC是從內溶素中分離的。

11.權利要求10所述的方法，其中從內溶素中分離的CBC是細胞結合結構域(CBD)或其截短的變體。

12.權利要求1所述的方法，其中結合結構域與至少一種以下噬菌體的CBC具有≥95％的同源性：沙門氏菌噬菌體SPN1S、沙門氏菌噬菌體10、沙門氏菌噬菌體ε15、沙門氏菌噬菌體SEA1、沙門氏菌噬菌體Spn1s、沙門氏菌噬菌體P22、李斯特氏菌噬菌體LipZ5、李斯特氏菌噬菌體P40、李斯特氏菌噬菌體vB_LmoM_AG20、李斯特氏菌噬菌體P70、李斯特氏菌噬菌體A511、葡萄球菌噬菌體P4W、葡萄球菌噬菌體K、葡萄球菌噬菌體Twort、葡萄球菌噬菌體SA97、或大腸桿菌O157:H7噬菌體CBA120。

13.權利要求1所述的方法，其中所述分開包括將所述感興趣的微生物捕獲在固體支持物上。

14.權利要求13所述的方法，其中所述固體支持物包括多孔板、過濾器、珠粒、側流條、濾條、濾片和濾紙中的至少一種。

15.權利要求1所述的方法，其還包括用于洗滌所捕獲的微生物以去除過量的未結合的MDP的步驟。

16.權利要求1所述的方法，其中與所述MDP結合的微生物被固定在固體支持物上以通過熒光顯微術檢查。

17.權利要求1所述的方法，其中所述MDP是重組蛋白或綴合蛋白。

18.權利要求1所述的方法，其中所述指示部分包括熒光團、熒光蛋白、顆粒或酶中的至少一種。

19.權利要求18所述的方法，其中所述酶包括螢光素酶、磷酸酶、過氧化物酶和糖苷酶中的至少一種。