[發(fā)明專利]試劑、分析血小板的方法及血液細(xì)胞分析儀

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201980008289.2
• 申請日: 2019-04-26
• 公開（公告）號: CN111656188B
• 公開（公告）日: 2021-10-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳庚文;張子千;葉燚;李朝陽
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司
• 主分類號: G01N33/49
• 分類號: G01N33/49;G01N15/14;G01N35/00
• 代理公司: 北京派特恩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11270
• 代理人: 崔曉嵐;張穎玲

一種試劑、使用該試劑在溶血條件下區(qū)分血小板的方法及血液細(xì)胞分析儀。該試劑包括：作為溶血劑的第一試劑；以及第二試劑，該第二試劑為膜特異性染料或線粒體特異性染料。使用該試劑、方法及分析儀可以在溶血條件實現(xiàn)對血小板的區(qū)分和網(wǎng)織紅細(xì)胞報警，進(jìn)一步的可以對白細(xì)胞進(jìn)行分類計數(shù)，從而能夠快速準(zhǔn)確地在單一通道內(nèi)對血樣進(jìn)行分析。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分析血小板的方法，特別涉及用染料分析血小板的方法。

背景技術(shù)

人血液中含有紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板等各種細(xì)胞，其中血小板是直徑為2～3微米的無核細(xì)胞，正常人的血液中含有15萬至35萬個/微升血小板。

眾所周知，血小板的常用測定方法之一是電阻抗法。該方法是使含血細(xì)胞的樣本從具有兩個電極的小孔間通過，當(dāng)有血細(xì)胞(例如血小板)通過時，電阻發(fā)生變化，從而產(chǎn)生電阻脈沖，然后將檢測到的脈沖繪制成直方圖進(jìn)行分析。正常的血液中，血小板的體積最小，白細(xì)胞體積最大，紅細(xì)胞體積居中。檢測到的脈沖強(qiáng)度與經(jīng)過小孔的細(xì)胞體積相關(guān)，因而通過體積劃分，就能夠區(qū)分不同細(xì)胞種類。然而，在測試有些特殊樣本時(如含有體積較大的血小板和體積較小的紅細(xì)胞的樣本)會影響血小板的檢測準(zhǔn)確性和精確度。這些特殊樣本通常來自患有疾病的受試者，因而檢測值的偏差會給臨床診斷帶來不利影響。

針對這種情況，已提出了用對血小板的表面抗原有特異性的標(biāo)記抗體對血小板進(jìn)行標(biāo)記并計數(shù)的方法(美國臨床病理學(xué)雜志(2001)：115，p460-464)。該方法，由于在測試過程中需要使用抗原抗體進(jìn)行反應(yīng)，因而需要花很長時間才能得到結(jié)果。因此，該方法不適用于諸如判斷是否需要輸血等需緊急作出判斷的測定。另外該方法中的檢測試劑也相對昂貴。

目前，流式細(xì)胞技術(shù)已廣泛用于迅速地測定血液中的細(xì)胞，比如美國專利US6，114，173公開了一種網(wǎng)織紅細(xì)胞與紅細(xì)胞測定以及血小板計數(shù)的方法，該方法使用了球形化試劑處理血樣，并用陽離子染料(惡嗪750)來快速染色網(wǎng)織紅細(xì)胞的RNA，再用流式細(xì)胞儀中測定樣品的散射光和吸收光，從而實現(xiàn)網(wǎng)織紅細(xì)胞、紅細(xì)胞及血小板的區(qū)分。

US 4,882,284公開了一種從紅細(xì)胞和血小板中識別未溶解的全血中的白細(xì)胞的方法，該方法中使用含有吸收紅色光的熒光染料(惡嗪170)與未溶解的全血接觸，之后使用流式細(xì)胞儀從紅細(xì)胞和血小板中區(qū)分白細(xì)胞并分類。

US 5,891,731公開了一種用于測定網(wǎng)織紅細(xì)胞的試劑其方法，該試劑具有至少一種特異性染色網(wǎng)織紅細(xì)胞的染料(惡嗪750)和至少另一種特異性染色白細(xì)胞的染料，經(jīng)處理后可明顯區(qū)分網(wǎng)織紅細(xì)胞群體及白細(xì)胞群體。

上述文獻(xiàn)雖然均使用了染料對血細(xì)胞進(jìn)行染色對來分析血樣，但一方面，它們均是在非溶血的情況下進(jìn)行的；另一方面，它們都不涉及使用染料來對血小板進(jìn)行染色的方式來對血小板進(jìn)行區(qū)分。

對此，SYSMEX公司的中國專利申請公開CN 101173921A中公開了一種特異性染色劑，能夠在熒光方向從其他血細(xì)胞和脂質(zhì)顆粒等雜質(zhì)中區(qū)分出血小板。然而，這種方法在區(qū)分血小板時需要在單獨的測試通道中進(jìn)行，使得儀器復(fù)雜化程度增加，由此將不可避免地導(dǎo)致成本上升；另外，與前述文獻(xiàn)相同，該方法同樣是在非溶血的條件下進(jìn)行的，并未提及在溶血條件下對血小板進(jìn)行檢測。

實際上，在傳統(tǒng)的血液分析系統(tǒng)中，對白細(xì)胞的分類計數(shù)意義尤為重要，而在檢測白細(xì)胞時一般需要將紅細(xì)胞破碎溶解(即在溶血條件下)，但由此產(chǎn)生大量細(xì)胞碎片等雜質(zhì)增大了血小板的測定難度。因此，目前血小板的測定通常在非溶血的條件下于單獨通道內(nèi)進(jìn)行。

由上述內(nèi)容可知，在環(huán)境更加惡劣且難度更大的溶血條件下檢測血小板具有較大的臨床意義。若能在溶血條件下快速、準(zhǔn)確檢測血小板，就可以將阻抗通道檢測血小板容易受小紅細(xì)胞影響的因素消除，同時還能在實現(xiàn)對白細(xì)胞進(jìn)行分類計數(shù)，從而有利于實現(xiàn)單一通道內(nèi)完成血液中各成分的分析。

因此，在血液檢測領(lǐng)域中，存在著在溶血條件下快速、便捷地檢測血小板的迫切需要。

發(fā)明內(nèi)容