[發明專利]一種細胞誘導的方法

有效

• 申請號: 201980005643.6
• 申請日: 2019-01-29
• 公開（公告）號: CN111344392B
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: 周琪;李偉;何正泉;王柳
• 申請（專利權）人: 中國科學院動物研究所
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;C12N5/071
• 代理公司: 北京彩和律師事務所 11688
• 代理人: 閆桑田;劉磊

1.(-)-Blebbistatin O-Benzoate在細胞體外誘導中的應用，其中，

所述在細胞體外誘導中的應用選自： (-)-Blebbistatin O-Benzoate在體外誘導細胞轉分化中的應用或(-)-Blebbistatin O-Benzoate在體外誘導細胞永生化中的應用中的任一種；

所述轉分化為在體外誘導成纖維細胞轉分化為脂肪細胞；

所述永生化為在體外誘導成纖維細胞轉化為永生化細胞。

2.一種在體外誘導成纖維細胞轉分化為脂肪細胞的方法，其包括以下步驟：將成纖維細胞培養在培養基中，在培養基中加入Myosin抑制劑和BMP4，繼續培養，直至得到脂肪細胞，其中，

所述Myosin抑制劑為(-)-Blebbistatin O-Benzoate。

3.如權利要求2所述的方法，其中，所述培養基包括基礎培養液、胎牛血清和脂肪誘導培養液中的任一種或幾種。

4.如權利要求3所述的方法，其中，所述基礎培養液包括高糖DMEM、胎牛血清和雙抗，和/或，所述脂肪誘導培養液包括N2B27培養液、N2添加劑、B27添加劑、2%牛血清白蛋白、β-巰基乙醇、Glutamax、胰島素和雙抗，以及血清替代物。

5.如權利要求3或4中任一項所述的方法，其中，所述脂肪誘導培養液進一步包括A83-01和/或SB431542。

6.一種在體外誘導成纖維細胞轉分化為脂肪細胞的培養基，其包括：

Myosin抑制劑、BMP4、基礎培養液、胎牛血清和脂肪誘導培養液，其中，

所述Myosin抑制劑為 (-)-Blebbistatin O-Benzoate。

7.如權利要求6所述的培養基，其中，所述基礎培養液包括高糖DMEM、胎牛血清和雙抗，和/或，所述脂肪誘導培養液包括N2B27培養液、N2添加劑、B27添加劑、2%牛血清白蛋白、β-巰基乙醇、Glutamax、胰島素和雙抗，以及血清替代物。

8.如權利要求6或7中任一項所述的培養基，其中，所述脂肪誘導培養液進一步包括A83-01和/或SB431542。

9.一種在體外誘導成纖維細胞轉化為永生化細胞的方法，其包括以下步驟：將成纖維細胞培養在培養基中，在培養基中加入Myosin抑制劑，繼續培養，直至得到永生化細胞，其中，

所述Myosin抑制劑為 (-)-Blebbistatin O-Benzoate。

10.如權利要求9所述的方法，其中，所述培養基包括基礎培養液、胎牛血清和永生化誘導培養液中的任一種或幾種。

11.如權利要求10所述的方法，其中，所述基礎培養液包括高糖DMEM和雙抗，和/或，所述永生化誘導培養液包括N2B27培養液、N2添加劑、B27添加劑、2%牛血清白蛋白、β-巰基乙醇、GlutaMAX、胰島素和雙抗。

12.如權利要求10或11中任一項所述的方法，其中，所述永生化誘導培養液進一步包括KOSR、CHIR99021和A83-01中的一種或幾種。

13.一種在體外誘導成纖維細胞轉化為永生化細胞的培養基，其包括：

Myosin抑制劑、基礎培養液、胎牛血清和永生化誘導培養液，其中，

所述Myosin抑制劑為 (-)-Blebbistatin O-Benzoate。

14.如權利要求13所述的培養基，其中，所述基礎培養液包括高糖DMEM和雙抗，和/或，所述永生化誘導培養液包括N2B27培養液、N2添加劑、B27添加劑、2%牛血清白蛋白、β-巰基乙醇、GlutaMAX、胰島素和雙抗。

15.如權利要求13或14中任一項所述的培養基，其中，所述永生化誘導培養液進一步包括KOSR、CHIR99021和A83-01中的一種或幾種。