[發(fā)明專利]合成δ-生育三烯酚重組釀酒酵母菌株及構(gòu)建方法及用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911424045.0
• 申請(qǐng)日: 2019-12-31
• 公開（公告）號(hào): CN111235044B
• 公開（公告）日: 2022-01-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 宋浩;孫鴻;楊景麗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/19
• 分類號(hào): C12N1/19;C12P17/06;C12R1/865
• 代理公司: 天津市北洋有限責(zé)任專利代理事務(wù)所 12201
• 代理人: 曹玉平

本發(fā)明公開了合成δ?生育三烯酚重組釀酒酵母菌株及構(gòu)建方法及用途，方法為：將外源基因hpd,hpt和vte1整合到釀酒酵母BY4742菌株的基因組rDNA位點(diǎn)，得到重組菌株VE01；在重組菌株VE01基因組δ位點(diǎn)整合thmg1基因和ggppssa基因，得到重組菌株VE02，本發(fā)明構(gòu)建的一種合成δ?生育三烯酚重組釀酒酵母菌株，能夠以葡萄糖為碳源重頭合成δ?生育三烯酚，代替植物提取的方法。這種利用微生物合成δ?生育三烯酚的方法的操作簡(jiǎn)便，同時(shí)能得到產(chǎn)量高的δ?生育三烯酚。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物合成技術(shù)領(lǐng)域，更具體的說是涉及一種合成δ-生育三烯酚重組釀酒酵母菌株及構(gòu)建方法。

背景技術(shù)

維生素E(Vitamin E)是一種脂溶性維生素，其水解產(chǎn)物為生育酚，是最主要的抗氧化劑之一。早在20世紀(jì)20年代就被人們發(fā)現(xiàn)，Evans和他的同事在研究生殖過程中發(fā)現(xiàn)，酸敗的豬油可以引起大鼠的不孕癥。在1936年分離出結(jié)晶體，1938年被瑞士化學(xué)家人工合成。維生素E包含一組八個(gè)結(jié)構(gòu)相關(guān)的生育酚(tocopherols)和生育三烯酚(tocotrienols)，早期，因?yàn)樯┓酉啾壬觼碚f有很低的生物活性，對(duì)其研究較少。近來研究表明，生育三烯酚具有生育酚所沒有的功能，如神經(jīng)元保護(hù)作用以及降低膽固醇等作用。且生育三烯酚具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性,可以在體外及體內(nèi)抑制腫瘤細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,阻滯細(xì)胞周期和抑制血管生成。具有很好的臨床應(yīng)用前景。δ-生育三烯酚是維生素E的一種異構(gòu)體，由于其潛在的多樣化生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用，例如抗癌活性，預(yù)防骨質(zhì)疏松癥和降低膽固醇，最近受到了廣泛關(guān)注。

到目前為止，根據(jù)關(guān)于維生素E市場(chǎng)前景的報(bào)告，市場(chǎng)上維生素E約80％來自化學(xué)合成，20％來自植物或種子的提取。然而，化學(xué)合成維生素E的過程中使用了有毒的催化劑，使得該過程對(duì)環(huán)境不友好，不可持續(xù)。然而，δ-生育三烯酚主要是從油棕和大米中提取的，很少有人對(duì)其微生物的生物合成進(jìn)行研究。工程釀酒酵母可以作為生產(chǎn)δ-生育三烯酚的替代和有前途的方式，代替植物中的提取方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種合成δ-生育三烯酚重組釀酒酵母菌株。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種合成δ-生育三烯酚重組釀酒酵母菌株的構(gòu)建方法。

本發(fā)明的第三個(gè)目的是重組釀酒酵母菌株生產(chǎn)δ-生育三烯酚的用途。

本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下：

合成δ-生育三烯酚重組釀酒酵母菌株的構(gòu)建方法，包括如下步驟：將外源基因hpd,hpt和vte1整合到釀酒酵母BY4742菌株的基因組rDNA位點(diǎn)，得到重組菌株VE01；在重組菌株VE01基因組δ位點(diǎn)整合thmg1基因和ggppssa基因，得到重組菌株VE02,所述hpd基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；hpt基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；vte1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；thmg1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；ggppssa基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示。

上述方法構(gòu)建的合成δ-生育三烯酚重組釀酒酵母菌株。

合成δ-生育三烯酚重組釀酒酵母菌株生產(chǎn)δ-生育三烯酚的用途，包括如下步驟：將權(quán)利要求2的合成δ-生育三烯酚重組釀酒酵母菌株VE02在發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)發(fā)酵，獲得δ-生育三烯酚，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為35.66g/L葡萄糖、24.46g/L蛋白胨、14.01g/L酵母浸粉，余量為水。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明構(gòu)建的一種合成δ-生育三烯酚重組釀酒酵母菌株，能夠以葡萄糖為碳源重頭合成δ-生育三烯酚，代替植物提取的方法。這種利用微生物合成δ-生育三烯酚的方法的操作簡(jiǎn)便，同時(shí)能得到產(chǎn)量高的δ-生育三烯酚。

附圖說明

圖1為釀酒酵母中的δ-生育三烯酚合成路徑。