[發明專利]測定復雜組分中生物素的高效液相色譜分析方法

在審

• 申請號: 201911422329.6
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN113125580A
• 公開（公告）日: 2021-07-16
• 發明（設計）人: 李勇;黃小梅;于多;田敏卿
• 申請（專利權）人: 深圳奧薩制藥有限公司;芙萊特(深圳)精準營養食品集團有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
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• 代理人: 暫無信息

本發明提供一種高效測定復雜組分中生物素的液相色譜分析方法，是以0.1M磷酸二氫鉀、0.01M磷酸氫二鉀混合溶液?乙腈為流動相進行梯度洗脫，可避免其他組分的干擾，在30分鐘內準確靈敏地檢測出生物素的含量。該方法專屬性強、精密度高、穩定性較好、準確度高，操作簡單，試劑與耗材價廉易得。本發明提供的方法適用于含多種維生素礦物質組合物的片劑、粉末、膠囊等劑型中測定生物素，可有效地節約檢測成本和時間。

技術領域

本發明涉及一種高效快速測定復雜組分中生物素含量的液相色譜分析方法。具體通過對樣品前處理和色譜條件的優化，使得實驗簡單，方便且準確快速檢測出復雜組分中生物素的含量。

背景技術

生物素(分子式為C₁₀H₁₆N₂O₃S)是一種水溶性維生素，又叫維生素H或者維生素B₇，是合成維生素C的必要物質，是脂肪和蛋白質正常代謝不可或缺的物質。

生物素能維持上皮組織結構的完整和健全、增強機體免疫反應和抵抗力、也是維持人體自然生長、發育和正常人體機能健康必要的營養素。

生物素可改善胰島素調節血糖，亦有助于體內進行更有效的新陳代謝幫助減肥。

生物素的結構如下：

目前檢測生物素的方法中，色譜方法較為常用，但存在色譜條件復雜、洗脫時間長或采用繁瑣梯度等問題。另外，由于多種維生素礦物質片中含有多種成分，生物素含量比較低，樣本前處理過程中，其他成分以及輔料對生物素的檢測含量會有很大影響，且其他成分可能會對生物素造成降解，影響檢測準確性。因此，有必要研究一種高效準確快速測定復雜組分中生物素的液相色譜方法。

發明內容

為克服上述問題，本發明提供一種提取率高、穩定性好、準確度高、重復性好的生物素專屬高效液相色譜方法，本發明的具體技術方案：

一種用于高效測定復雜組合物中生物素含量的高效液相色譜分析方法，其特征在于，供試品的提取溶劑為超純水，提取方式選自水浴超聲、水浴振蕩或磁力攪拌中的一種，流動相A為磷酸鹽緩沖液，流動相B為乙腈，流動相A與流動相B的混合比例為95～55:5～45，梯度洗脫，流速：0.8～1.2ml/min；紫外檢測波長設定為 200nm～210nm。

在本發明中，所述提取方法方式為水浴超聲，水浴超聲的時間選自10-20min，優選15min。

在本發明中，作為流動相A的磷酸鹽緩沖液選自磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀，磷酸二氫銨中的一種或兩種，優選磷酸二氫鉀與磷酸氫二鉀混合溶液。

在本發明中，用于高效液相色譜法中柱溫為30～35℃。

在本發明中，用于高效液相色譜法中的樣品盤溫度為30℃。

在本發明中，流動相A與流動相B的混合溶液的pH值選自3.00～4.20，優選 3.90～4.20，更加優選4.00。

在一個實施方案中，進行上述色譜分析的色譜儀器及條件為：

檢測儀器：高效液相色譜儀(Thermo Fisher，U3000)，配備紫外檢測器；

色譜條件：

色譜柱：Agilent-Polaris 5 C18 Ether，150mm*4.6mm，5μm；檢測波長： 200～210nm；流速：0.8～1.2ml/min；柱溫：30～35℃，最佳柱溫：35℃；運行時間： 30min。流動相：磷酸鹽緩沖液-乙腈；洗脫方式：梯度洗脫如表1；

表1洗脫梯度