[發(fā)明專(zhuān)利]ssl2084基因在合成中長(zhǎng)鏈脂肪酸中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911421275.1
• 申請(qǐng)日: 2019-12-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110950941B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳高;鐘懷榮;路曉媛;戴美學(xué);張燕;李國(guó)衛(wèi);游銀偉;邊斐;鐘軻;羅澤宇
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究中心
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/405
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/405;C12N15/31;C12N1/13;C12N15/66;C12P7/64;C12R1/89
• 代理公司: 濟(jì)南竹森知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 37270
• 代理人: 朱家富

1.一種ssl2084基因在合成集胞藻中長(zhǎng)鏈飽和脂肪酸中的應(yīng)用，其特征在于，所述ssl2084基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，合成中長(zhǎng)鏈飽和脂肪酸時(shí)集胞藻的培養(yǎng)溫度為18℃～20℃或28℃～32℃；

所述集胞藻為集胞藻PCC6803；

所述中長(zhǎng)鏈飽和脂肪酸為C12:0、C16:0、C18:0飽和脂肪酸。

2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，通過(guò)構(gòu)建過(guò)表達(dá)中長(zhǎng)鏈脂肪酸的蛋白ssl2084的集胞藻工程菌，然后經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)，誘導(dǎo)培養(yǎng)，提純，制得中長(zhǎng)鏈飽和脂肪酸。

3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述集胞藻工程菌的構(gòu)建過(guò)程如下：

(1) 以Pcpc560片段為啟動(dòng)子片段，與ssl2084基因進(jìn)行基因融合，制得融合片段Pcpc560+ssl2084；

所述Pcpc560 的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

(2) 制備同源重組上游臂slr1285U基因片段，核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

(3) 制備同源重組下游臂slr1285D基因片段，核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

(4) 用KpnI內(nèi)切酶酶切步驟(2)制得的同源重組上游臂slr1285U基因片段，與同樣經(jīng)KpnI內(nèi)切酶酶切的質(zhì)粒pBluescript SK T1T2連接，制得質(zhì)粒pBluescript SK T1T2-slr1285U；

(5) 用SacI內(nèi)切酶酶切步驟(3)制得的同源重組下游臂slr1285D 基因片段，與同樣經(jīng)SacI內(nèi)切酶酶切的步驟(4)制得的質(zhì)粒pBluescript SK T1T2-slr1285U連接，制得質(zhì)粒pBluescript SK T1T2-slr1285UD；

(6) 將步驟(1)制得的融合片段Pcpc560+ssl2084經(jīng)SalI、EcoRI內(nèi)切酶酶切后，與同樣經(jīng)SalI、EcoRI內(nèi)切酶酶切的步驟(5)制得的質(zhì)粒pBluescript SK T1T2-slr1285UD連接，制得重組載體p5S1285UD-ssl2084；

(7) 用BamHI內(nèi)切酶酶切質(zhì)粒pBluescript-Spe，回收壯觀霉素抗性Spe片段，與同樣經(jīng)BamHI內(nèi)切酶酶切的步驟(6) 制得的質(zhì)粒p5S1285UD-ssl2084連接，制得質(zhì)粒pBluescriptSK T1T2-slr1285UD-Spe；

(8) 將步驟(7) 制得的重組載體pBluescript SK T1T2-slr1285UD-Spe 轉(zhuǎn)化集胞藻PCC6803，經(jīng)篩選，制得轉(zhuǎn)基因集胞藻。