[發明專利]人多能干細胞誘導分化為脂肪細胞的方法

在審

• 申請號: 201911421173.X
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111172101A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 燕小寧;張娜;王釗林;郝子娟;李志強
• 申請（專利權）人: 上海林望生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077;C12Q1/02
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 陸惠中;田歡

本發明屬于細胞分化領域，尤其涉及一種人多能干細胞誘導分化為脂肪細胞的方法。所述方法包括以下步驟：1)將人多能干細胞置于培養容器中，使用脂肪分化培養基誘導所述人多能干細胞使其分化為脂肪細胞；所述脂肪分化培養基中添加有吲哚美辛、胰島素和L?抗壞血酸；2)以增值性的方式培養步驟1)中得到的脂肪細胞。該方法簡單，得到的脂肪細胞可用于科研、臨床或者工業用途。

技術領域

本發明屬于細胞分化領域，尤其涉及一種人多能干細胞誘導分化為脂肪細胞的方法。

背景技術

干細胞是能夠在各組織中獲取的分化之前步驟的未分化細胞的統稱。干細胞具有在未分化狀態下，規定期間內能夠持續地制造出與自身相同的細胞的性質，以及在適當的條件下，能夠分化為組成生物組織的多種細胞的性質。

根據分化能力和生成時期，干細胞大致可以分為胚胎干細胞(embryonic stemcell)和成體干細胞(adult stem cell)。并且，根據干細胞的分化能力，還可以分為多能性(pluripotency)、多潛能性(multipotency)及單能性(unipotency)干細胞。

脂肪細胞分為白色脂肪細胞和褐色脂肪細胞，在正常情況下，脂肪細胞數目到了青春期后就不再增加。目前，將人多能干細胞誘導分化為脂肪細胞鮮有報道。

發明內容

本發明的發明人努力尋找高效率地誘導從間充質干細胞制備出脂肪細胞的方法，發現使用特定的脂肪分化培養基可以完成該目的，從而完成了本發明。

因此，本發明的目的之一在于，首次公開了將人多能干細胞誘導分化為脂肪細胞的方法，得到的脂肪細胞可應用于科研研究或者工業用途。

具體的，本發明的技術方案如下：

本發明第一個方面公開了一種人多能干細胞誘導分化為脂肪細胞的方法，包括以下步驟：

1)將人多能干細胞置于培養容器中，使用脂肪分化培養基誘導所述人多能干細胞使其分化為脂肪細胞；所述脂肪分化培養基中添加有吲哚美辛、胰島素和L-抗壞血酸；

2)以增值性的方式培養步驟1)中得到的脂肪細胞。

優選的，所述脂肪分化培養基中添加有0.1-0.15mmol/L的吲哚美辛。

優選的，所述脂肪分化培養基中添加有3-4mg/L的胰島素。

優選的，步驟1)中誘導時間為12-16天。

優選的，步驟1)中，所述人多能干細胞置于Matrigel膠鋪設的載體上培養。

優選的，所述步驟2)包括：

21)消化步驟1)得到的脂肪細胞，使用維持培養基來培養脂肪細胞，得到第一代脂肪細胞；所述維持培養基為添加有血清、苯環丙胺和bFGF的基礎培養基；

22)將步驟21)得到的第一代脂肪細胞使用所述維持培養基進行培養后再次傳代，得到第二代脂肪細胞；

23)待第二代脂肪細胞長滿后，使用基礎培養基進行培養及傳代。

更優選的，步驟21)中，所述苯環丙胺的濃度為2-3μM。

更優選的，步驟21)中，所述bFGF的濃度為2-4ng/mL。

本發明第二個方面公開了上述的方法得到的脂肪細胞。

本發明第三個方面公開了上述的脂肪細胞在藥物篩選中的應用。優選的，所述藥物為治療肥胖癥的藥物或者治療糖尿病的藥物。

在符合本領域常識的基礎上，上述各優選條件，可任意組合，而不超出本發明的構思與保護范圍。

本發明相對于現有技術具有如下的顯著優點及效果：