[發明專利]一種HPLC-MS-MS法測定人血漿中卡馬西平成分含量的方法

有效

• 申請號: 201911420890.0
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111157641B
• 公開（公告）日: 2022-09-16
• 發明（設計）人: 王櫻桃;滕馨瑩
• 申請（專利權）人: 安領生物醫藥（蘇州）有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72
• 代理公司: 蘇州隆恒知識產權代理事務所(普通合伙) 32366
• 代理人: 周子軼

本發明公開了一種HPLC?MS?MS法測定人血漿中卡馬西平成分含量的方法，包括以下步驟：分別向校正標示樣品、質控樣品、內標樣品以及待測人血漿中加入50.0ng/mL卡馬西平?d8內標工作液，再分別用乙腈稀釋4倍，分別離心取上清液，然后再分別將上清液用20％乙腈水溶液稀釋4倍即可進樣分析。分別向空白基質和水樣中加入50％乙腈水溶液，再分別用乙腈稀釋4倍，分別離心取上清液，然后再分別將上清液用20％乙腈水溶液稀釋4倍即可進樣分析。將上述處理后的各個樣品分別注入液相色譜質譜聯用儀中，對卡馬西平以及卡馬西平?d8成分進行定量檢測。本發明對樣品分析簡單便捷，檢出限低、靈敏度高、重復性和回收率好。

技術領域

本發明涉及了生物醫藥技術領域，具體的是一種HPLC-MS-MS法測定人血漿中卡馬西平成分含量的方法。

背景技術

生物樣品分析隨著質譜技術的發展，其應用日益廣泛。但由于生物樣品中的基質復雜，且藥物濃度低。因此，需要獲得更準確且穩定的測定方法。HPLC-MS-MS技術中，高效液相色譜是溶質在固定相和流動相之間進行的一種連續多次的交換過程，它借助溶質在兩相間的分配系數、親和力、吸附能力、離子交換或分子大小不同引起的排阻作用差別使不同溶質進行分離。采用HPLC-MS-MS技術，建立并驗證人血漿中卡馬西平濃度測定的液質聯用方法，可以獲得更加準確且穩定性高的含量測定方法，從而便于科研以及工業化應用。

發明內容

為了克服現有技術中的缺陷，本發明實施例提供了提供了一種HPLC-MS-MS法測定人血漿中卡馬西平成分含量的方法，其對樣品分析簡單便捷，檢出限低、靈敏度高、重復性和回收率好。

本發明公開了一種HPLC-MS-MS法測定人血漿中卡馬西平成分含量的方法，包括以下步驟：

步驟一、樣品制備：

制備校正標示樣品：以卡馬西平為溶質，以50％乙腈水溶液為溶劑，配制卡馬西平梯度濃度為20～20000ng/mL的校正標示工作液；分別取各濃度校正標示工作液，用空白基質稀釋20倍，得到校正標示樣品；

制備質控樣品：以卡馬西平為溶質，以50％乙腈水溶液為溶劑，配制卡馬西平梯度濃度為20～16000ng/mL的質控工作液；分別取各濃度質控工作液，用空白基質稀釋20倍，得到質控樣品；

制備內標樣品：以卡馬西平-d8為溶質，以甲醇二甲基亞砜溶液為溶劑，得到卡馬西平-d8儲備液；將儲備液用50％乙腈水溶液稀釋得到卡馬西平-d8濃度為50.0ng/mL、10000ng/mL的內標工作液；分別取各濃度內標工作液，用空白基質稀釋20倍，得到內標樣品；

步驟二、樣品處理：

分別向校正標示樣品、質控樣品、內標樣品以及待測人血漿中加入50.0ng/mL卡馬西平-d8內標工作液，再分別用乙腈稀釋4倍，分別離心取上清液，然后再分別將上清液用20％乙腈水溶液稀釋4倍；

分別向空白基質和水樣中加入50％乙腈水溶液，再分別用乙腈稀釋4倍，分別離心取上清液，然后再分別將上清液用20％乙腈水溶液稀釋4倍；

步驟三、樣品檢測：

將上述步驟二中處理后的校正標示樣品、質控樣品、內標樣品、待測人血漿、空白基質和水樣分別注入液相色譜質譜聯用儀中，對卡馬西平以及卡馬西平-d8成分進行定量檢測。

作為優選，所述步驟一中，甲醇二甲基亞砜溶液中，甲醇和二甲基亞砜的體積比為1:1。

作為優選，所述檢測步驟中，按照下述液相色譜條件進行檢測：

固定相：填料粒徑為5μm，直徑2mm，長度50mm的Gemini C18色譜柱；

流動相：流動相為為A和B的混合體系，A為甲酸水溶液，其中甲酸與水的體積比為0.1:100；B為甲酸乙腈溶液，其中甲酸與乙腈的體積比為0.1:100；