[發(fā)明專利]測(cè)定血漿中氯吡格雷及其非活性代謝物濃度的HPLC-MS/MS方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201911420883.0 | 申請(qǐng)日： | 2019-12-31 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN111208219A | 公開（公告）日： | 2020-05-29 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 王櫻桃;胡玲華 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 安領(lǐng)生物醫(yī)藥（蘇州）有限公司 |
| 主分類號(hào)： | G01N30/02 | 分類號(hào)： | G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72 |
| 代理公司： | 蘇州隆恒知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32366 | 代理人： | 周子軼 |
| 地址： | 215000 江蘇省蘇州市*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 測(cè)定 血漿 中氯吡格雷 及其 活性 代謝物 濃度 hplc ms 方法 | ||
1.一種測(cè)定血漿中氯吡格雷及其非活性代謝物濃度的HPLC-MS/MS方法，其特征在于，所述方法中采用氯雷他定和卡馬西平-d8作為內(nèi)標(biāo)，所述方法包括以下步驟：
儲(chǔ)備液的制備：用HPLC甲醇作為溶劑，分別將硫酸氫氯吡格雷、CCAM和氯雷他定加入HPLC甲醇中，配置得到硫酸氫氯吡格雷儲(chǔ)備液、CCAM儲(chǔ)備液以及氯雷他定儲(chǔ)備液；
工作液的制備：用HPLC甲醇和水作為溶劑，將所述硫酸氫氯吡格雷儲(chǔ)備液和所述CCAM儲(chǔ)備液分別稀釋，獲得硫酸氫氯吡格雷工作液、CCAM工作液；用乙腈作為溶劑，將所述氯雷他定儲(chǔ)備液和卡馬西平-d8加入所述乙腈溶劑中，獲得內(nèi)標(biāo)工作液；
校正標(biāo)準(zhǔn)品的制備：取空白血漿，將所述硫酸氫氯吡格雷工作液和所述CCAM工作液加入到所述空白血漿中，獲得校正標(biāo)準(zhǔn)品；
質(zhì)控樣品的制備：取空白血漿，將所述硫酸氫氯吡格雷工作液和所述CCAM工作液加入到所述空白血漿中，獲得質(zhì)控樣品；
樣品的檢測(cè)分析：取96孔板，在所述96孔板上做標(biāo)示，并向各個(gè)樣品孔內(nèi)加入對(duì)應(yīng)的樣品；向?qū)?yīng)的樣品中相應(yīng)地加入所述內(nèi)標(biāo)工作液或乙腈以進(jìn)行蛋白沉淀；對(duì)蛋白沉淀后的各樣品進(jìn)行離心作用，并分別提取上清液；在30℃下采用氮?dú)鈱⒏魃锨逡捍蹈桑傧蚋魃锨逡褐屑尤霃?fù)溶液；封板、渦旋均勻，然后進(jìn)樣分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述復(fù)溶液為乙腈體積分?jǐn)?shù)為25％的乙腈水溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述內(nèi)標(biāo)工作液中，所述氯雷他定的濃度為20ng/mL，所述卡馬西平-d8的濃度為4ng/mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法中，液相色譜參數(shù)如下：
色譜柱：Xbridge C18 2.1*50mm，3.5μm，柱溫為35℃；
流動(dòng)相：包括流動(dòng)相A和流動(dòng)相B，所述流動(dòng)相A為：甲酸體積分?jǐn)?shù)為0.1％的甲酸水溶液，所述流動(dòng)相B為：甲酸體積分?jǐn)?shù)為0.1％的甲酸乙腈溶液；
質(zhì)譜條件：采用電噴霧離子原，正離子檢測(cè)，選擇多反應(yīng)監(jiān)測(cè)工作方式進(jìn)行一/二級(jí)質(zhì)譜分析，質(zhì)譜檢測(cè)工作參數(shù)如下：硫酸氫氯吡格雷的母離子/特征子離子的檢測(cè)離子對(duì)為322.1/212.2，CCAM的母離子/特征子離子的檢測(cè)離子對(duì)為308.2/198.2，氯雷他定的母離子/特征子離子的檢測(cè)離子對(duì)為383.2/337.1，卡馬西平-d8的母離子/特征子離子的檢測(cè)離子對(duì)為237.1/194.1。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，流動(dòng)相梯度洗脫條件為：第0.01～0.2min，所述流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)為80％；第0.8～1.00min，所述流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)為40％；第1.80～2.50min，所述流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)為0％；第2.51～2.70min，所述流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)為80％；第2.71～3.30～min，所述流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)為0％；第3.31～4.60min，所述流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)為80％。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，對(duì)蛋白沉淀后的各樣品進(jìn)行離心作用的條件包括：在10℃，4000rpm條件下離心15min。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述硫酸氫氯吡格雷工作液和所述CCAM工作液中，所述硫酸氫氯吡格雷和所述CCAM的濃度分別介于20～20000ng/mL之間。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述校正標(biāo)準(zhǔn)品中，所述硫酸氫氯吡格雷和所述CCAM的濃度分別介于1.00～1000ng/mL之間。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述質(zhì)控樣品中，硫酸氫氯吡格雷和所述CCAM的濃度分別介于1～750ng/mL之間。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述空白血漿為食蟹猴血漿。
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