[發明專利]鞍帶石斑魚胰島素樣因子INSL-3基因、編碼蛋白及其應用

有效

• 申請號: 201911420747.1
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111018967B
• 公開（公告）日: 2020-09-22
• 發明（設計）人: 孫凱輝;洪宇聰;張勇;王曉珊;范衡珊;趙書燕
• 申請（專利權）人: 廣東越群海洋生物研究開發有限公司
• 主分類號: C07K14/65
• 分類號: C07K14/65;C07K14/46;C12N15/12;C12N15/16;A01K67/027
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星;朱聰聰

本發明公開了鞍帶石斑魚胰島素樣因子INSL?3基因、編碼蛋白及其應用。胰島素樣因子INSL?3基因的編碼蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本發明從鞍帶石斑魚的cDNA中克隆得到了胰島素樣因子INSL?3基因，該胰島素樣因子INSL?3基因能夠促進精母細胞產生和/或促進鞍帶石斑魚轉雄，因此可以獲得功能性的雄性親魚，為鞍帶石斑魚人工繁育工作順利進行提供了條件。

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，具體涉及鞍帶石斑魚胰島素樣肽INSL-3基因、編碼蛋白及其應用。

背景技術

胰島素樣因子3(INSL3)最初被鑒定為在睪丸的支持(Leydig)細胞中高度表達的新基因，并且最初被命名為Leydig胰島素樣肽(Ley-IL)；它同時由于與肽激素松弛素的同源性也導致了松弛素樣因子的名稱(RLF)；然而，INSL3現在是它的通用名稱，并且已知它是松弛素肽家族的成員。INSL3最早由公豬睪丸克隆所得，從那時起，其cDNA被廣泛的從哺乳動物的睪丸和其他組織中克隆所得，包括人、絨猴、牛、綿羊、小鼠、大鼠、狗、鹿和山羊；除了哺乳動物外，其cDNA也在三種不同的鯊魚和鳥的睪丸中克隆得到；同時也確定insl3基因存在于硬骨魚中，2009年在斑馬魚的Leydig細胞中克隆得到。目前認為，INSL3可以作為Leydig細胞的標記基因。在斑馬魚的研究中發現，INSL3能刺激成年斑馬魚精原細胞分化和精子的形成；并且也參與Leydig細胞分化。

鞍帶石斑魚因其味道鮮美、營養豐富而廣受歡迎，是一種具有很高經濟價值的食用魚類。鞍帶石斑魚是典型的雌雄同體魚類，生殖過程中要經歷雌性過程后，再轉變為雄性，生殖周期很長，獲得雄性一般都需要6年以上，在進行人工繁殖時，雄性親魚非常稀缺。而且由于環境的破壞和過渡捕撈，在自然海域中捕撈到野生雄性親魚機會更加渺茫。因此，如何獲得功能性的雄性親魚成為鞍帶石斑魚人工繁育工作能否順利進行的關鍵。所以對于研究其生殖機制是很有必要的。

發明內容

本發明的目的是提供一種胰島素樣因子INSL-3基因、編碼蛋白及應用。

本發明的第一個目的是提供胰島素樣因子INSL-3基因的編碼蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。共124個氨基酸，分子量為13.9千道爾頓。

本發明的第二個目的是提供上述胰島素樣因子INSL-3基因的編碼蛋白的編碼基因。

優選，所述的胰島素樣因子INSL-3基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本發明的第三個目的是提供胰島素樣因子INSL-3基因在制備促進精母細胞產生和/或促進鞍帶石斑魚轉雄的藥物中的應用。即在制備獲得功能性的雄性鞍帶石斑魚中的應用。

本發明從鞍帶石斑魚的cDNA中克隆得到了胰島素樣因子INSL-3基因，該胰島素樣因子INSL-3基因能夠促進精母細胞產生和/或促進鞍帶石斑魚轉雄，因此可以獲得功能性的雄性親魚，為鞍帶石斑魚人工繁育工作順利進行提供了條件。

附圖說明：

圖1是INSL-3基因mRNA在斜帶石斑魚精巢中原位雜交圖，左邊小圖是正義探針雜交圖；

圖2是INSL-3基因過表達質粒注射45天后性腺組織學切片分析，SC:精母細胞；O：卵母細胞。

具體實施方式：

以下實施例是對本發明的進一步說明，而不是對本發明的限制。

實施例1：鞍帶石斑魚INSL-3基因cDNA全序列的克隆

根據鞍帶石斑魚轉錄組數據庫中的信息，在開放讀碼框拼接序列兩端設計特異引物，上游引物F序列(具體為5’-ATGTCTGCTGTGAAGTGTCT-3’)，下游引物R序列(具體為5’-CTAGCAAAACTGGATCAACT-3’)。