[發(fā)明專利]一種裂殖壺菌發(fā)酵產(chǎn)DHA的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911419014.6
• 申請(qǐng)日: 2019-12-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111378699A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-07-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李翔宇;陸姝歡;周齊;余超;汪志明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 嘉必優(yōu)生物技術(shù)（武漢）股份有限公司
• 主分類號(hào): C12P7/64
• 分類號(hào): C12P7/64;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種裂殖壺菌發(fā)酵產(chǎn)DHA的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)裂殖壺菌經(jīng)活化、擴(kuò)培和發(fā)酵之后得到發(fā)酵液；

(2)將所述發(fā)酵液部分放料至酶解罐中酶解，再將得到的酶解液轉(zhuǎn)移至分離設(shè)備，提取DHA毛油，菌粕回收待用；

(3)剩余發(fā)酵液補(bǔ)充部分培養(yǎng)基成分和所述回收待用的菌粕，繼續(xù)發(fā)酵，重復(fù)步驟(2)直至發(fā)酵周期結(jié)束。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中所述部分放料為將發(fā)酵罐體積的20～70％的發(fā)酵液放料至酶解罐中，優(yōu)選為40～50％。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(3)中所述培養(yǎng)基成分包括碳源；

優(yōu)選地，所述碳源選自葡萄糖、甘油、果糖、木糖、蔗糖、麥芽糖、淀粉糖化液或木質(zhì)纖維素糖化液中的任意一種或至少兩種的組合，優(yōu)選為葡萄糖；

優(yōu)選地，補(bǔ)加后發(fā)酵液中碳源濃度達(dá)到發(fā)酵培養(yǎng)基中碳源質(zhì)量濃度的20～50％；

優(yōu)選地，步驟(3)中所述繼續(xù)發(fā)酵時(shí)間為60-72h；

優(yōu)選地，步驟(3)中所述發(fā)酵周期為490～745h；

優(yōu)選地，所述發(fā)酵周期中進(jìn)行8～10次放料。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟(3)中所述培養(yǎng)基成分還包括氮源；

優(yōu)選地，所述氮源選自花生餅粉、黃豆餅粉、棉子餅粉、玉米漿、酵母浸膏、酵母粉、魚(yú)粉、蠶蛹粉、蛋白胨、麩皮或谷氨酸鈉中的任意一種或至少兩種的組合，優(yōu)選為谷氨酸鈉和/或酵母浸膏；

優(yōu)選地，所述氮源與菌粕一起補(bǔ)入剩余發(fā)酵液中；

優(yōu)選地，補(bǔ)加后發(fā)酵液中氮的質(zhì)量濃度達(dá)到發(fā)酵培養(yǎng)基中氮質(zhì)量濃度的60～80％。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟(1)中所述擴(kuò)培的溫度為25～30℃；

優(yōu)選地，步驟(1)中所述擴(kuò)培的時(shí)間為48～96h；

優(yōu)選地，步驟(1)中所述發(fā)酵時(shí)的接種量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的10～30％，優(yōu)選為16～30％；

優(yōu)選地，步驟(1)中所述發(fā)酵時(shí)間為72-96h；

優(yōu)選地，步驟(1)中所述發(fā)酵溫度為25～30℃。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述酶解所用的酶選自蛋白酶、纖維素酶、蝸牛酶、幾丁質(zhì)酶中的任意一種或至少兩種的組合，優(yōu)選為蛋白酶和纖維素酶的組合；

優(yōu)選地，步驟(2)所述酶解時(shí)酶解液的pH為6-9；

優(yōu)選地，步驟(2)所述酶解溫度為40-70℃；

優(yōu)選地，步驟(2)所述酶解時(shí)酶在發(fā)酵液中的體積濃度為0.08～0.20％；

優(yōu)選地，步驟(2)所述酶解的時(shí)間為5～10h。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述活化時(shí)使用的培養(yǎng)基為活化培養(yǎng)基；

優(yōu)選地，步驟(1)所述擴(kuò)培時(shí)使用的培養(yǎng)基為種子培養(yǎng)基；

優(yōu)選地，步驟(1)所述發(fā)酵時(shí)使用的培養(yǎng)基為發(fā)酵培養(yǎng)基；

優(yōu)選地，所述活化培養(yǎng)基成分包括10-20g/L碳源、20～40g/L氮源和10～25g/L無(wú)機(jī)鹽；

優(yōu)選地，所述種子培養(yǎng)基成分包括20～40g/L碳源、20～40g/L氮源和5～20g/L無(wú)機(jī)鹽；

優(yōu)選地，所述發(fā)酵培養(yǎng)基成分包括20～40g/L碳源、15～35g/L氮源和5～20g/L無(wú)機(jī)鹽。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述方法使用的發(fā)酵系統(tǒng)包括：種子罐、發(fā)酵罐、酶解罐、分離設(shè)備、廢料罐、補(bǔ)料罐和收集罐，所述補(bǔ)料罐包括氮源補(bǔ)料罐和碳源補(bǔ)料罐；

所述種子罐、發(fā)酵罐、酶解罐和分離設(shè)備依次相連，所述收集罐與分離設(shè)備相連，所述分離設(shè)備、廢料罐與發(fā)酵罐依次相連，所述氮源補(bǔ)料罐與發(fā)酵罐相連，所述碳源補(bǔ)料罐與發(fā)酵罐相連。