[發明專利]蚯蚓腸道內容物強化土壤中四環素類抗生素消減的方法

有效

• 申請號: 201911418253.X
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111069276B
• 公開（公告）日: 2021-12-07
• 發明（設計）人: 孫明明;晁會珍;鄭曉璇;王鑫偉;胡鋒
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: B09C1/10
• 分類號: B09C1/10
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 唐循文

1.蚯蚓腸道內容物在強化土壤中四環素類抗生素消減中的應用，其特征在于，首先選取具有明顯環帶，體重在3-5g的新鮮威廉環毛蚓，用中性PBS緩沖液清洗蚯蚓體表2-3遍，放在無菌培養皿中清腸6h；并插入冰浴暫存，靜置10min，促使蚯蚓排糞完全，投放至10-100mg/kg的四環素類污染土壤中，保持避光和常溫培養14天后，取出蚯蚓，再次進行體表清洗，放在培養皿中清腸，清腸的蚯蚓用25%無水乙醇將蚯蚓浸泡2min，觀察蚯蚓在無水乙醇中的生理狀態，當蚯蚓停止扭動身軀并逐漸靜止，但仍能觀察到蚯蚓心臟輕微跳動時，取出蚯蚓，用濾紙擦去蚯蚓體表無水乙醇，之后放置在冰上敞口的培養皿中2min，使蚯蚓體表的無水乙醇充分揮發；解剖獲取新鮮蚯蚓腸道內容物，解剖獲取新鮮蚯蚓腸道內容物的時間控制在5min之內；向新鮮蚯蚓腸道內容物中加入1mL的PBS緩沖液，再采用渦旋儀將內容物混合均勻，渦旋儀的轉速為1500rpm，渦旋時間為10s；采集實際環境中四環素污染土壤，去除土壤中的雜質，再對土壤進行破碎篩分；然后向土壤中添加蚯蚓腸道內容物，按照土壤與蚯蚓腸道內容物的質量比500:1-1000:1進行混合，進行人工培養30-60天后完成修復。