[發明專利]大腸桿菌發酵專用培養基的制作工藝

在審

• 申請號: 201911416284.1
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN110878275A
• 公開（公告）日: 2020-03-13
• 發明（設計）人: 吳康華;黎明;陳波
• 申請（專利權）人: 揚中酵誠生物技術研究有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P1/04;C12R1/19
• 代理公司: 上海凱瑪頓知識產權代理事務所(普通合伙) 31359
• 代理人: 胡薇

本發明涉及一種大腸桿菌發酵專用培養基的制作工藝，其特征在于，包含發酵培養基和補料培養基兩部分配方組分。本發明的有益效果在于：蛋白胨和酵母粉含量極低，降低成本的同時，減少了非特異性蛋白對后續純化的影響；高密度可達到菌體濕重200g/L以上。

技術領域

本發明涉及培養基技術領域，具體的說是一種大腸桿菌發酵專用培養基的制作工藝。

背景技術

大腸桿菌是工業生產上應用最為廣泛的菌種，用來生產各種諸如蛋白質、核酸類以及小肽類等產品。大腸桿菌在生長發育過程中，需要各種營養物，通常由培養基中的成分來提供。

現有技術中，大腸桿菌發酵培養基配方中通常有有機碳、有機氮、無機鹽、生長因子和水等，當存在含量較高的有機氮時，首先發酵培養成本較高，其次由于雜蛋白的產生，增加了非特異性蛋白對后續純化的影響，增加了后期純化難度；且難以進一步提高高密度可達到菌體濕重200g/L以上。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于提供一種配方改良的大腸桿菌發酵專用培養基的制作工藝。僅添加少量的有機氮源，即可實現大腸桿菌的高密度發酵以及高表達。

本發明是通過以下技術方案實現的：

設計一種大腸桿菌發酵專用培養基的制作工藝，其特征在于：包含以下步驟：

步驟一：對第一組分中的成分進行稱量，加入溶劑中攪拌，加熱溶解，攪拌均勻后靜置，過濾并除去雜質；第一組分包括Na₂HPO₄.12H₂O、KH₂PO_4、NH₄Cl、無水硫酸鈉、蛋白胨PEPTONE、酵母提取物YEAST；

步驟二：對第二組分中的成分進行稱量，加入溶劑中攪拌，加熱溶解，攪拌均勻后靜置，過濾并除去雜質；第二組分包括無水氯化鈣；

步驟三：對第三組分中的成分進行稱量，加入溶劑中攪拌，加熱溶解，攪拌均勻后靜置，過濾并除去雜質；第三組分包括七水硫酸鎂；

步驟四：對第四組分中的成分進行稱量，加入溶劑中攪拌，加熱溶解，攪拌均勻后靜置，過濾并除去雜質；第四組分包括三氯化鐵；

步驟五：將第一組分、第二組分、第三組分、第四組分及甘油按一定配方配制，即為大腸桿菌專用培養基，

補料培養基包括以下濃度組分：

步驟六，120～130℃高壓滅菌10～20min。

進一步的，所述發酵培養基與補料培養基的體積比為2:1。

進一步的，發酵培養基pH7.3。

本發明的有益效果在于：經過M9配方改良，蛋白胨和酵母粉含量極低，降低成本的同時，減少了非特異性蛋白對后續純化的影響；高密度可達到菌體濕重200g/L以上。添加少量有機氮源，實現高密度發酵。實現大腸桿菌高表達，同時降低生產成本；減少雜蛋白的產生，降低后期純化難度。

將組分1，組分2，組分3，組分4及甘油按一定配方配制，即為大腸桿菌專用培養基，市面上培養基基本為單一成分，需要根據自己的配方進行搭配；而本申請提供各組分，同時提供配比，直接使用即可完成大腸桿菌高密度發酵。預先混合，烘干，可直接作為培養基用于大腸桿菌發酵，減少培養基的配制，減少批間差。

具體實施方式

下面對本發明的技術方案作進一步說明，相信對本領域技術人員來說是清楚的。

<實施例1>