[發(fā)明專(zhuān)利]一種二聯(lián)滅活疫苗及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911415878.0
• 申請(qǐng)日: 2019-12-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110974951B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-12-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李俊;吳曉燕;時(shí)建立;彭喆;徐紹建;王碩;李琛;劉暢;韓紅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所
• 主分類(lèi)號(hào): A61K39/295
• 分類(lèi)號(hào): A61K39/295;A61K39/12;A61K39/02;A61K39/39;A61P31/20;A61P31/04
• 代理公司: 濟(jì)南泉城專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所 37218
• 代理人: 安麗艷

本發(fā)明提供了一種二聯(lián)滅活疫苗，含滅活的豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白和豬肺炎支原體，所述Cap蛋白編碼基因序列如SEQ ID NO.1所示，所述豬肺炎支原體保藏號(hào)為：CGMCC No.18879。解決了豬圓環(huán)病毒2型和豬肺炎支原體已知疫苗的毒株地域性、疫苗滅活劑及佐劑等問(wèn)題。本發(fā)明提供的二聯(lián)滅活疫苗，含滅活的豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白和豬肺炎支原體，能夠提供更簡(jiǎn)單、有效、低成本的預(yù)防和控制豬圓環(huán)病毒和豬肺炎支原體感染引起的疾病。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于疫苗制備領(lǐng)域，具體涉及一種豬圓環(huán)病毒2型和豬支原體肺炎的疫苗。

背景技術(shù)

豬圓環(huán)病毒2型（Porcine circovirs type 2，PCV2）是斷奶仔豬多系統(tǒng)綜合征(Post-weaning MμLtisystemic Wasting Syndrome，PMWS)、豬呼吸道病綜合征(PorcineRespiratory Disease complex，PRDC)和豬皮炎和腎病綜合征(Porcine Dermatitis andNepHropathy syndrome，PDNS)的主要病原之一。PCV2屬于圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬，是一種無(wú)囊膜，單鏈DNA病毒。PCV2主要有PCV2a，PCV2b，PCV2c，PCV2d和PCV2e共5個(gè)基因型，近幾年，PCV2d變?yōu)橹饕獋魅镜幕蛐汀ap蛋白由病毒基因組中ORF2開(kāi)放閱讀框編碼，是主要的結(jié)構(gòu)蛋白，構(gòu)成病毒的核衣殼，Cap蛋白是主要的結(jié)構(gòu)蛋白，研究表明其N(xiāo)端含有一個(gè)由41個(gè)氨基酸殘基組成的核定位信號(hào)(NLS)，且含有大量的大腸埃希菌稀有密碼子，這將嚴(yán)重影響外源蛋白的表達(dá)。相關(guān)研究證實(shí)，Cap蛋白免疫動(dòng)物可以產(chǎn)生病毒的中和抗體。ORF2基因已經(jīng)作為研制基因工程疫苗的重點(diǎn)對(duì)象。但是，現(xiàn)有技術(shù)中Cap蛋白采用真核表達(dá)系統(tǒng)產(chǎn)量低，分離純化困難；而ORF2編碼蛋白的N端存在著大量串聯(lián)或單聯(lián)的大腸埃希氏菌稀有密碼子，嚴(yán)重影響在大腸桿菌中的表達(dá)，所以目前報(bào)道進(jìn)行原核表達(dá)的多為截短型Cap蛋白，這樣雖然蛋白表達(dá)量較高，但不是完整的Cap蛋白，不能形成完整的病毒樣顆粒，同時(shí)一些功能性信號(hào)區(qū)域和保守序列沒(méi)能表達(dá)。對(duì)ORF2基因進(jìn)行密碼子優(yōu)化，改變了難以在大腸桿菌中表達(dá)的稀有密碼子，極大地提高了蛋白的表達(dá)量，同時(shí)表達(dá)的完整Cap蛋白氨基酸序列和親本序列完全一致，沒(méi)有改變其免疫原性，為保證制備的疫苗免疫效果打下良好的基礎(chǔ)。

PCV2對(duì)豬的致病性主要表現(xiàn)為免疫系統(tǒng)的損傷，可引起淋巴結(jié)腫大、淋巴細(xì)胞減少等病變，使感染豬處于嚴(yán)重免疫抑制狀態(tài)，這是PMWS發(fā)生的重要原因。

豬支原體肺炎（MPS）又稱(chēng)豬喘氣病或地方性流行性肺炎，是由豬肺炎支原體（Mhp）引起的一種接觸性慢性呼吸性傳染病。不同年齡不同品種的豬均能感染。患病豬主要表現(xiàn)為咳嗽和氣喘，剖解時(shí)以肺部病變?yōu)橹鳎霈F(xiàn)“肉變樣”或“胰變樣”等實(shí)質(zhì)性病變。有報(bào)道成豬肺炎支原體感染后可引起動(dòng)物機(jī)體免疫抑制，造成其抵抗力下降而招致繼發(fā)感染。對(duì)PCV2而言，它會(huì)增加它的病毒載量，病延長(zhǎng)病毒在動(dòng)物體內(nèi)存在的時(shí)間，協(xié)同其促進(jìn)肺部和淋巴病變，從而提高PMWS的發(fā)生率。

臨床調(diào)查顯示，豬圓環(huán)病毒和豬支原體肺炎的混合感染極為廣泛，發(fā)病率嚴(yán)重，給養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。疫苗接種是防治豬圓環(huán)病毒和豬支原體肺炎的重要方法。

為了更簡(jiǎn)單、有效、降低成本的預(yù)防和控制豬圓環(huán)病毒和豬肺炎支原體感染引起的疾病，我們研制了豬圓環(huán)病毒2型、豬支原體肺炎二聯(lián)滅活疫苗（BL21/pET30a-ORF2株+ Q株），研究其安全性與有效性指標(biāo)。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)豬圓環(huán)病毒2型和豬肺炎支原體已知疫苗的毒株地域性、疫苗滅活劑及佐劑等問(wèn)題，本發(fā)明提供一種預(yù)防豬圓環(huán)病毒2型和豬支原體肺炎有效的疫苗，本發(fā)明的疫苗在受試者中誘導(dǎo)針對(duì)豬圓環(huán)病毒2型和豬肺炎支原體攻擊的保護(hù)性免疫應(yīng)答。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案。

一種二聯(lián)滅活疫苗，含滅活的豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白和豬肺炎支原體，所述Cap蛋白編碼基因序列如SEQ ID NO. 1所示，所述豬肺炎支原體保藏號(hào)為：CGMCC No. 18879。