[發(fā)明專利]針對(duì)寨卡病毒囊膜蛋白的鼠源單克隆抗體

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911415795.1
• 申請(qǐng)日: 2019-12-31
• 公開（公告）號(hào): CN111100201B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 龔睿
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢班科生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/10
• 分類號(hào): C07K16/10;C12N15/13;A61P31/14
• 代理公司: 武漢世躍專利代理事務(wù)所(普通合伙) 42273
• 代理人: 倪婭

本發(fā)明公開了一種針對(duì)寨卡病毒囊膜蛋白的鼠源單克隆抗體，通過(guò)篩選和基因改造后，所獲抗體的特異性好、中和活性強(qiáng)、抗聚集性增，適用于寨卡病毒的防治。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地指一種針對(duì)寨卡病毒囊膜蛋白的鼠源單克隆抗體。

背景技術(shù)

寨卡病毒(ZIKV)是一種黃病毒科病毒，感染該病毒后可導(dǎo)致新生兒的小頭畸形并影響嬰幼兒的神經(jīng)發(fā)育，成年人感染后可能發(fā)生格林巴利綜合征(GBS)導(dǎo)致神經(jīng)損傷。目前尚無(wú)獲批的疫苗和特效藥物，這里我們利用自己構(gòu)建的寨卡病毒囊膜蛋白免疫小鼠，獲得了具備較強(qiáng)中和活性的鼠源單克隆抗體，將來(lái)可以運(yùn)用于寨卡病毒的防治。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于填補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的空白，提供一種特異性好的針對(duì)寨卡病毒囊膜蛋白的鼠源單克隆抗體。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種針對(duì)寨卡病毒囊膜蛋白的鼠源單克隆抗體，其輕鏈序列如SEQ No.1所示，其重鏈序列如SEQ No.3所示。

上述針對(duì)寨卡病毒囊膜蛋白的鼠源單克隆抗體對(duì)應(yīng)的堿基序列，其輕鏈序列如SEQ No.4所示，其重鏈序列如SEQ No.5所示。

本申請(qǐng)的發(fā)明人在中國(guó)專利申請(qǐng)201811613477.1的研究基礎(chǔ)上，利用其構(gòu)建噬菌體文庫(kù)的方法進(jìn)行篩選并進(jìn)一步基因改造，獲得了效果較好的鼠源單克隆抗體。

本發(fā)明的有益效果：通過(guò)篩選和基因改造后，所獲抗體的特異性好、中和活性強(qiáng)、抗聚集性增強(qiáng)，適用于寨卡病毒的防治。

附圖說(shuō)明

圖1-1為Tango軟件預(yù)測(cè)D10氨基酸序列的易聚集區(qū)。

圖1-2為Tango軟件預(yù)測(cè)D11氨基酸序列的易聚集區(qū)。

圖1-3為D10和D11的重鏈突變區(qū)域比較圖。

圖2為SDS-PAGE檢測(cè)D11抗體。

圖3為ELISA分析D11抗體與寨卡病毒囊膜蛋白的結(jié)合圖。

圖4為D11抗體對(duì)寨卡病毒的中和活性圖。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。以下實(shí)施例是在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過(guò)程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。

實(shí)施例1：D10抗體序列的獲得

基于已構(gòu)建的免疫小鼠Fab噬菌體展示文庫(kù)(該文庫(kù)的獲得方法來(lái)自中國(guó)專利申請(qǐng)201811613477.1公開的黃病毒科病毒囊膜蛋白的融合蛋白及其制備方法與應(yīng)用，利用其中的融合蛋白作為免疫原免疫小鼠后獲得其cDNA，利用其作為噬菌體展示文庫(kù)的構(gòu)建材料)，我們進(jìn)行了三輪的篩選，并通過(guò)單克隆phage ELISA，將其中的陽(yáng)性克隆送測(cè)序，得到了D10候選克隆的堿基序列，并經(jīng)氨基酸翻譯軟件，得到了其氨基酸序列，輕鏈氨基酸序列如SEQ No.1所示，其重鏈氨基酸序列如SEQ No.2所示。

實(shí)施例2：利用Tango軟件對(duì)獲得的D10氨基酸序列進(jìn)行優(yōu)化

利用Tango軟件(http://tango.crg.es/)對(duì)D10候選克隆的氨基酸序列進(jìn)行易聚集區(qū)預(yù)測(cè)，發(fā)現(xiàn)其中存在較強(qiáng)的易聚集區(qū)域，如圖1-1，因此對(duì)該區(qū)域進(jìn)行點(diǎn)突變，得到D11抗體，其輕鏈氨基酸序列如SEQ No.1所示，其重鏈氨基酸序列如SEQ No.3所示，對(duì)應(yīng)堿基序列，輕鏈如SEQ No.4所示，重鏈如SEQ No.5所示。突變后的氨基酸序列經(jīng)Tango軟件重新預(yù)測(cè)，發(fā)現(xiàn)該易聚集區(qū)被明顯改善，如圖1-2，1-3。

實(shí)施例3：293F細(xì)胞表達(dá)D11抗體并SDS-PAGE檢測(cè)