[發(fā)明專利]一種碳碳雙鍵異構(gòu)體的雙鍵位置鑒定方法

有效

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• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111060584B
• 公開（公告）日: 2021-04-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳素明;馮桂芳
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢大學(xué)
• 主分類號: G01N27/64
• 分類號: G01N27/64;G01N1/44
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 李欣榮

本發(fā)明公開了一種碳碳雙鍵異構(gòu)體的雙鍵位置鑒定方法，通過將蒽醌或菲醌類化合物與含碳碳雙鍵的化合物在可見光激發(fā)條件下進(jìn)行Paternò?Büchi反應(yīng)(PB反應(yīng))，并應(yīng)用串聯(lián)質(zhì)譜方法對反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行檢測和分析，進(jìn)而判斷碳碳雙鍵異構(gòu)體中雙鍵位置；涉及的PB反應(yīng)條件簡單，副反應(yīng)少，反應(yīng)快，產(chǎn)率高，可有效改善現(xiàn)有判斷脂質(zhì)化合物不飽和雙鍵位置的PB光化學(xué)反應(yīng)紫外光激發(fā)條件易導(dǎo)致副反應(yīng)等問題。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種碳碳雙鍵異構(gòu)體的雙鍵位置鑒定方法。

背景技術(shù)

脂質(zhì)是生物體的重要組成成分之一，在生物體內(nèi)存在著數(shù)量龐大的同分異構(gòu)體，脂質(zhì)結(jié)構(gòu)的多樣性賦予了其多種重要的生物和物理功能。脂質(zhì)化合物的異常代謝，將會引起機(jī)體的多種生理疾病的發(fā)生。因此，開發(fā)脂質(zhì)異構(gòu)體分析的新方法，明確其在疾病的發(fā)生和發(fā)展過程中的變化及其代謝調(diào)控的網(wǎng)絡(luò)機(jī)制，具有重要的生物學(xué)意義和臨床價值。

隨著現(xiàn)代質(zhì)譜技術(shù)以及其數(shù)據(jù)處理工具的發(fā)展，可以對這些脂質(zhì)化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行系統(tǒng)地鑒定和分析。但是，目前基于質(zhì)譜的脂質(zhì)組學(xué)分析在碳碳雙鍵位置鑒定方面卻受到了極大的限制。這主要由于在傳統(tǒng)的脂質(zhì)組學(xué)分析工作流程中，通常采用串聯(lián)質(zhì)譜中的CID技術(shù)，無法使目標(biāo)化合物斷裂產(chǎn)生與碳碳雙鍵結(jié)構(gòu)相關(guān)的特征離子。

針對上述技術(shù)問題，2015年清華大學(xué)的瑕瑜等開發(fā)了一種利用在線Paternò-Büchi(PB)光化學(xué)反應(yīng)鑒定生物樣本中的不飽和脂質(zhì)鍵位置異構(gòu)體的新方法。通過在紫外光照射下與丙酮化合物進(jìn)行反應(yīng)，生成一個含氧的四元環(huán)結(jié)構(gòu)，并進(jìn)一步通過CID進(jìn)行碎裂得到用于判斷碳碳雙鍵位置的特征碎片離子。然而，該方法采用紫外光激發(fā)方式會導(dǎo)致一些副反應(yīng)的生成，且丙酮的分子量小，會導(dǎo)致某些PB產(chǎn)物與底物的質(zhì)量重疊，增加數(shù)據(jù)分析的復(fù)雜性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的主要目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種使用可見光激發(fā)的PB反應(yīng)進(jìn)行碳碳雙鍵異構(gòu)體位置鑒定的方法。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種碳碳雙鍵異構(gòu)體的雙鍵位置鑒定方法，包括如下步驟：

1)分別將含不飽和雙鍵的底物(碳碳雙鍵異構(gòu)體)和含羰基的反應(yīng)試劑溶于溶劑中，攪拌均勻得底物溶液和反應(yīng)試劑溶液；

2)將所得底物溶液和反應(yīng)試劑溶液混合，然后在可見光的激發(fā)下進(jìn)行光照反應(yīng)(Paternò-Büchi反應(yīng)，PB反應(yīng))，得到反應(yīng)產(chǎn)物；

3)將步驟2)所得反應(yīng)產(chǎn)物注入質(zhì)譜中，經(jīng)離子源離子化后，進(jìn)一步經(jīng)CID碎裂得到特征碎片離子；

4)對特征碎片離子進(jìn)行分析，反向推導(dǎo)出不飽和雙鍵的位置。

上述方案中，所述含不飽和雙鍵的底物為含有不飽和雙鍵的脂質(zhì)化合物；為不飽和的脂肪酸、甘油酯或甘油磷脂等脂類化合物。

上述方案中，所述含羰基的反應(yīng)試劑為蒽醌、菲醌或二者對應(yīng)的衍生物。

上述方案中，所述溶劑為水、甲醇、乙醇、乙腈、氯仿中的一種或幾種。

上述方案中，所述可見光波長為380～430nm。

上述方案中，所述含羰基的反應(yīng)試劑與含不飽和雙鍵底物的摩爾比為0.01～100。

優(yōu)選的，所述羰基的反應(yīng)試劑與含不飽和雙鍵底物的摩爾比為1～15:1。

上述方案中，所述光照反應(yīng)時間大于0.5min。

優(yōu)選的，所述光照反應(yīng)時間為0.5～15min。

上述方案中，步驟4)中所述分析步驟為根據(jù)步驟2)所得產(chǎn)物的二級質(zhì)譜圖，分析得到理論的二級碎片離子的分子式，與底物或光照反應(yīng)產(chǎn)物的分子式對比，并結(jié)合特征離子的不飽和度，從而反向推導(dǎo)出雙鍵的位置。