[發明專利]一種競爭性均相化學發光檢測方法及其應用

在審

• 申請號: 201911412040.6
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN113125415A
• 公開（公告）日: 2021-07-16
• 發明（設計）人: 強中華;徐靜心;范樹芹;李臨
• 申請（專利權）人: 科美診斷技術股份有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/543;G01N33/577
• 代理公司: 北京聿宏知識產權代理有限公司 11372
• 代理人: 劉建軍;吳大建

本發明涉及一種競爭性均相化學發光檢測方法，其包括如下步驟：將被分析物與包含第一組合物和第二組合物的試劑、第三組合物及第四組合物相接觸后形成待測混合物；提供激發光至少一次照射所述待測混合物；然后檢測由此產生的化學發光信號強度，從而判斷被分析物是否存在和/或被分析物的濃度。所述方法利用“差異性受體微球”，使得所述方法同時具有優異的功能靈敏度和檢測范圍。

技術領域

本發明屬于均相化學發光檢測技術領域，具體涉及一種競爭性均相化學發光檢測方法及其應用。

背景技術

競爭性免疫分析是一種用于小分子半抗原定量分析的檢測方法。放射免疫分析(RIA)是最早建立的競爭性免疫分析方法，并榮獲1974年度諾貝爾生理醫學獎。在放射性免疫分析中，含有放射性核素標記的競爭抗原(標記抗原)和限量的特異性抗體，標本中待檢抗原和作為試劑的標記抗原，分別競爭性與特異性抗體結合。分離結合標記物(B)和游離標記物(F)，并測定結合標記物的放射活性(或強度，單位每分鐘計數，CPM)，放射活性與待檢抗原呈反比例函數關系。采用系列已知濃度校準品，獲得校準品的數學函數關系(校準函數，可簡單理解為校準曲線)。未知標本按照校準品的同樣條件操作，測定放射活性，再通過標準函數獲得待測標本的濃度值。

在競爭性免疫分析中，競爭抗原的用量直接關乎競爭性免疫分析的功能靈敏度。此外，在競爭性免疫分析中，選擇合適特異性抗體和使用濃度同樣至關重要。化學發光分析具有很好分析性能，分析特異性、分析靈敏度、自動化操作等較好滿足臨床要求。但是，針對某些特殊指標如甾體類激素，對功能靈敏度和檢測范圍均有很高的要求，而現有化學發光免疫分析、電化學發光免疫分析、光激化學發光免疫分析等尚存在缺陷，不能有效兼顧功能靈敏度和分析范圍的特殊要求。因此，亟需一種化學發光檢測技術，其能兼顧功能靈敏度和分析范圍的要求。

發明內容

本發明針對現有技術的不足，提供了一種競爭性均相化學發光檢測方法，利用該方法進行檢測時，同時具有優異的功能靈敏度和檢測范圍。

為此本發明第一方面提供了一種競爭性均相化學發光檢測方法，其包括如下步驟：將被分析物與包含第一組合物和第二組合物的試劑、第三組合物及第四組合物相接觸后形成待測混合物；提供激發光至少一次照射所述待測混合物；然后檢測由此產生的化學發光信號強度，從而判斷被分析物是否存在和/或被分析物的濃度；其中，

所述第一組合物包含第一受體以及與之結合的第一抗體或其結合片段，所述第一抗體或其結合片段是特異性結合被分析物的檢測抗體；

所述第二組合物包含第二受體以及與之結合的第二抗體或其結合片段，所述第二抗體或其結合片段是特異性結合所述被分析物的檢測抗體；

所述受體能夠與單線態氧作用產生化學發光；

所述第三組合物包含與被分析物競爭結合所述檢測抗體的競爭抗原，所述競爭抗原與特異性結合配對成員中的一員結合；

所述第四組合物包含可產生活性氧的供體，所述供體與特異性結合配對成員中的另一員結合；

所述第一抗體或其結合片段與被分析物特異性結合的親和力高于所述第二抗體或其結合片段與被分析物特異性結合的親和力；同時，

所述第一抗體或其結合片段與第一受體的質量比低于所述第二抗體或其結合片段與第二抗體的質量比。

在本發明的一些實施方式中，所述第一抗體或其結合片段與所述第一受體的質量比選自1:(100～1000)，優選選自1:(200～800)，更優選選自1:(300～600)。

在本發明的另一些實施方式中，所述第一組合物在所述試劑中的濃度高于所述第二組合物在所述試劑中的濃度。

在本發明的一些優選的實施方式中，所述第一組合物在所述試劑中的質量濃度與所述第二組合物在所述試劑中的質量濃度比為(2～50):1，優選為(2～25):1，更優選為(2～10):1。