[發明專利]一種靈芝孢子的保存和激活方法

在審

• 申請號: 201911409905.3
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111117891A
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發明（設計）人: 劉長斯;龍丹萍;石盧寧;黃宗延
• 申請（專利權）人: 廣西仙草堂制藥有限責任公司
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12N1/38;C12N13/00
• 代理公司: 北京風雅頌專利代理有限公司 11403
• 代理人: 李生梅

1.一種靈芝孢子的保存和激活方法,其特征在于，包括以下步驟：

a.取剛剛從靈芝子實體收集到的孢子，立即浸泡于液氮中10-30秒，然后取出，再浸泡于-40～-20℃的去活液中120-220秒，得去活孢子；

b.取去活孢子加入與去活液相同溫度的改良液體石蠟中進行密封，得封存體，然后將封存體置于保存溫度為2-10℃的冰箱中即可保存3-5年；

c.取步驟b中保存于冰箱中的封存體，開封后從改良液體石蠟中取出去活孢子，然后用濾紙吸干表面的改良液體石蠟，置于功率密度為1-9mW/cm²的微波下照射6-12分鐘，照射期間的溫度與步驟b中冰箱的保存溫度相同，得初級活化孢子；

d.取初級活化孢子，噴灑活化液后在10-20℃下靜置活化10-30分鐘，得終極活化孢子；所述終極活化孢子無需消毒便可直接用于接種培養。

2.根據權利要求1所述的一種靈芝孢子的保存和激活方法，其特征在于，步驟a中所述去活液包括以下重量份比的原料：魚腥藻15-25份、三角褐指藻13-27份、羊棲菜1-5份、海帶4-8份、纖維素酶0.07-0.13份、蛋白酶0.02-0.06份、褐藻酸鈉裂解酶0.01-0.03份、新鮮蘆薈16-26份、鳶尾黃素0.15-0.75份。

3.根據權利要求2所述的一種靈芝孢子的保存和激活方法，其特征在于，所述去活液的制備方法為：取魚腥藻、三角褐指藻、海帶、羊棲菜、海帶，加入纖維素酶、褐藻酸鈉裂解酶酶解100-200分鐘，得酶解物，備用；取新鮮蘆薈，去掉葉肉，搗碎后，按料液比1:15-25加入氫氧化鈉水溶液，超聲處理45-65分鐘，然后過濾，收集濾液，接著加入濾液等體積的石油醚萃取2-4次，收集下層水層，加入酶解物，攪拌均勻，隨后調節pH值至中性，過濾后加入鳶尾黃素，再經過0.22μm的濾膜過濾除菌，得去活液。

4.根據權利要求3所述的一種靈芝孢子的保存和激活方法，其特征在于，所述氫氧化鈉水溶液的質量濃度為0.05％-0.13％。

5.根據權利要求1所述的一種靈芝孢子的保存和激活方法，其特征在于，步驟b中所述改良液體石蠟的制備方法為：按重量份比，取1-乙基-3-胍基硫脲鹽酸鹽20-30份，加入乙醇水溶液45-65份溶解后，再加入乙二酸4-10份和乙酰丙酸3-11份，加熱回流8-18小時得反應液，然后取反應液回收乙醇至無醇味，接著加入正己烷20-40份進行萃取，收集萃取后的正己烷得萃取液，然后萃取液經減壓蒸發除去正己烷，得離子液體；在得到的離子液體中加入離子液體重量10-20倍的液體石蠟、1-5倍的玉米朊，混合均勻，得改良液體石蠟。

6.根據權利要求1所述的一種靈芝孢子的保存和激活方法，其特征在于，步驟d中所述活化液包括以下重量份比的原料：磷酸鹽緩沖液70-130份、桑葉4-16份、橙皮3-9份、竹葉1-5份、西瓜皮1-5份、葉綠素0.1-0.5份、碧蘿芷2-7份、甘露低聚糖1-3份、青蒿素0.01-0.05份、春雷霉素0.01-0.05份和甘油20-50份。

7.根據權利要求6所述的一種靈芝孢子的保存和激活方法，其特征在于，所述活化液的制備方法為：取桑葉、橙皮、竹葉和西瓜皮，洗凈晾干，粉碎后加磷酸鹽緩沖液浸泡40-60分鐘，然后在55-65℃下回流提取75-95分鐘后，過濾，收集濾液，得植物提取液，備用；取葉綠素、碧蘿芷、甘露低聚糖，混合均勻，然后加入20％-30％重量的甘油，置于高壓均質機中進行均質，接著加入青蒿素、春雷霉素和剩余的甘油，攪拌均勻，得均質包合物，將均質包合物加入到所述植物提取液中，攪拌均勻，再經過0.22μm的濾膜過濾除菌，得活化液；所述均質包合物與植物提取液的重量比為1：6-16。