[發(fā)明專利]一株分泌抗裂谷熱病毒NSs蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911407906.4
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111041000B
• 公開（公告）日: 2022-07-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李文良;張聰;張紋紋;陳亞玲;楊蕾蕾;毛立;李基棕;孫敏;劉茂軍
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/10;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/535;C12R1/91
• 代理公司: 南京匯盛專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32238
• 代理人: 袁靜

本發(fā)明提供一株分泌抗裂谷熱病毒NSs蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。分泌抗裂谷熱病毒NSs蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株2D6D10，其保藏編號為CCTCC NO：C2019269。本發(fā)明還提供所述雜交瘤細(xì)胞株分泌的抗裂谷熱病毒NSs蛋白單克隆抗體及其在制備裂谷熱病毒NSs蛋白抗體檢測試劑盒方面的應(yīng)用。本發(fā)明雜交瘤細(xì)胞2D6D10能夠產(chǎn)生針對RVFV非結(jié)構(gòu)蛋白NSs蛋白的單克隆抗體，該單克隆抗體具有阻斷作用，因此本發(fā)明的阻斷ELISA試劑盒可用于病毒感染與滅活疫苗或缺失疫苗免疫抗體的鑒別診斷。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種分泌抗裂谷熱病毒NSs蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

裂谷熱(Rift valley fever，RVF)是由裂谷熱病毒(Rift valley fever virus,RVFV)引起反芻動物和人發(fā)病的人獸共患病。本病對反芻動物如綿羊、山羊、牛的影響較為嚴(yán)重，感染后出現(xiàn)疑似流感的癥狀，嚴(yán)重者導(dǎo)致懷孕母畜流產(chǎn)，在幼齡動物中有較高的死亡率。人對RVFV易感，可通過接觸、處理感染性材料或通過蚊蟲媒介叮咬感染，感染后可表現(xiàn)為疲勞、頭痛、發(fā)熱、肌肉關(guān)節(jié)疼痛、黃疸，甚至腦炎、出血熱等，嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡。

裂谷熱病毒(Rift Valley fever virus，RVFV)屬于布尼亞病毒科白蛉病毒屬，是一種負(fù)鏈RNA病毒，基因組包含三個節(jié)段：L、M、S。大片段(L)編碼的RNA依賴性RNA聚合酶。中片段(M)主要編碼囊膜糖蛋白。小片段(S)雙義編碼核衣殼蛋白N和非結(jié)構(gòu)蛋白NSs。

裂谷熱主要在西非和其他一些非洲國家呈地方性流行，在強(qiáng)降雨后牲畜和人群中周期性流行。2000年病毒被傳播到阿拉伯半島，引起沙特和也門的疫情大暴發(fā)，這也是該病第一次被傳播到在非洲大陸以外的地方。我國于2016年報道首例輸入性裂谷熱病例。隨著全球氣候變暖、貿(mào)易及人員流動頻繁，裂谷熱傳入的風(fēng)險進(jìn)一步增大。

目前已研制滅活疫苗和弱毒疫苗用于該病的免疫防控。但仍需建立特異的診斷方法，尤其是鑒別診斷技術(shù)用于該病的鑒別診斷。RVFV的實(shí)驗室檢測主要有ELISA、RT-PCR、病毒分離等，其中已報道以N蛋白為包被靶抗原的ELISA方法用于病毒抗體檢測，但該方法無法區(qū)別感染抗體與免疫抗體。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種分泌具有阻斷作用的抗RVFV NSs蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。

本發(fā)明的另一目的是提供所述雜交瘤細(xì)胞株分泌的抗裂谷熱病毒NSs蛋白單克隆抗體。

本發(fā)明的再一目的是提供所述抗裂谷熱病毒NSs蛋白單克隆抗體在制備裂谷熱病毒NSs蛋白抗體檢測試劑盒方面的應(yīng)用。

本發(fā)明的目的采用如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)。

分泌抗裂谷熱病毒NSs蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株2D6D10，其保藏編

號為CCTCC NO：C2019269。

在本發(fā)明中，所述雜交瘤細(xì)胞株2D6D10分泌的抗裂谷熱病毒NSs蛋白單克隆抗體。

在本發(fā)明中，所述抗裂谷熱病毒NSs蛋白單克隆抗體在制備裂谷熱病毒NSs蛋白抗體檢測試劑盒方面的應(yīng)用。

在本發(fā)明中，所述抗裂谷熱病毒NSs蛋白單克隆抗體是將雜交瘤細(xì)胞2D6D10株注射到BALB/c小鼠腹腔，制備腹水，離心并收集腹水上清液，純化后得到。

在本發(fā)明中，所述抗裂谷熱病毒NSs蛋白單克隆抗體經(jīng)HRP進(jìn)行標(biāo)記。

在本發(fā)明中，所述試劑盒還包括采用NSs蛋白包被的酶標(biāo)板。

在本發(fā)明中，所述試劑盒還包括陰性對照血清、陽性對照血清、TMB底物液及終止液。