[發明專利]一種同時檢測鴿圓環病毒、鴿腺病毒及鴿皰疹病毒1型的引物組、試劑盒和方法

有效

• 申請號: 201911406679.3
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111088399B
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 陳俊紅;戴鼎震;蔣加進;方光遠;陳濤;陸雨楠;黃翔宇
• 申請（專利權）人: 金陵科技學院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12Q1/6806;C12N15/11
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所 32237
• 代理人: 胡建華

本發明公開了一種同時檢測鴿圓環病毒、鴿腺病毒及鴿皰疹病毒1型的引物組、試劑盒和方法。與現有技術相比，本發明具有如下優勢：(1)采用本發明的試劑盒可以同時對鴿圓環病毒、鴿腺病毒及鴿皰疹病毒1型這三種病毒進行檢測，即進行一次實驗就可以得到三種病原菌的檢測結果。相比于傳統檢測方法，不僅節約成本和時間，也減少了勞動力的支出。(2)本發明采用該引物組靈敏度高，對PiAdV、PiHV?1及PiCV三種病毒DNA的檢測下限分別是32pg/μL、46pg/μL及55pg/μL。(3)本發明采用引物擴增后的產物分別為239bp、418bp和616bp，電泳能夠顯著分開，便于觀察。

技術領域

本發明屬于病毒檢測技術領域，具體涉及一種同時檢測鴿圓環病毒、鴿腺病毒及鴿皰疹病毒1型的引物組、試劑盒和方法。

背景技術

Ⅰ型鴿皰疹病毒(PHV-1)屬于皰疹病毒科，鴿是PHV-1的天然宿主，呈潛伏感染狀態。鴿群感染PHV-1后，成年鴿成為無癥狀的攜帶者，會不時地向外排毒；病毒不能通過蛋傳播，但雛鴿會在出殼不久因食用潛伏感染的親鴿鴿乳而被傳染。雛鴿可通過蛋黃獲得母源免疫力，從而受到保護，防止發生嚴重疾病或死亡；雖然它們能成活，但可成為無癥狀的病毒攜帶者。到目前為止，尚無可預防PHV-1感染的商品化疫苗。疫苗仍然不能防止感染鴿成為帶毒者，而且免疫鴿發生免疫抑制時會再次排毒。

鴿圓環病毒(Pigeon circovirus，PiCV)暫時被分類為新成立的病毒科―圓環病毒科的一個成員，圓環病毒是一種小型、無囊膜的球形病毒，含有環狀的、單股DNA。PiCV通常感染一歲以下的幼年鴿。多數感染可能是經口途徑引起的，但有證據表明PiCV也可經蛋傳播。鴿圓環病毒病既無特異性治療方法，也沒有任何合適的疫苗。因為大多數感染鴿更有可能死于繼發感染，診斷和治療必須將這些因素考慮進去。

鴿源腺病毒(PiAdV)感染任何年齡的鴿(10d～6年)。可發生二種類型的感染，一是鴿感染這種疾病的情形相當嚴重，病鴿嘔吐、水樣下痢和體重減輕等。感染傳播迅速，數日之內，鴿舍內所有鴿都會受到感染。發病率通常100％，如不繼發大腸桿菌類細菌感染死亡率較低。在沒有并發感染的病例，感染鴿將在2周左右康復。二是感染鴿發病后常在24～48h死亡，很少見到臨床癥狀，偶爾可見大嘔吐、黃色水樣排泄物，為期6～8周，死亡率約為30％～70％。

目前診斷上述感染的方法不多，尤其對于混合感染，單純采取病毒分離鑒定不僅成本高、周期長，而且難度大，分離率不高，容易造成漏診。因此，尋求用PCR進行基因擴增檢測不僅靈敏度高，而且檢測方便，準確率高，如能將多個病毒基因同時進行擴增檢測，那將更方便對混合感染的快速準確檢測，有利于凈化種群，促進鴿子健康養殖發展。

發明內容

發明目的：本發明所要解決的技術問題是針對現有技術的不足，提供一種同時檢測鴿圓環病毒、鴿腺病毒及鴿皰疹病毒1型的引物組、試劑盒和方法。

為了解決上述技術問題，本發明公開了一種同時檢測鴿圓環病毒、鴿腺病毒及鴿皰疹病毒1型的引物組，其包括引物對PiCV、引物對PiAdV、引物對PiHV-1；其中，所述的引物對PiCV包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的PiCV-F和核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的PiCV-R；所述的引物對PiAdV包括核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的PiAdV-F和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的PiAdV-R；所述的引物對PiHV-5包括核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的PiHV-1-F和核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的PiHV-1-R。

一種包括上述的引物組，可以同時檢測鴿圓環病毒、鴿腺病毒及鴿皰疹病毒1型的試劑盒也在本發明的保護范圍之內。

其中，所述引物組中的各引物的濃度均為10mM。

其中，所述的試劑盒還包括鴿圓環病毒、鴿腺病毒及鴿皰疹病毒1型的陽性對照品、DNA提取試劑、PCR反應試劑和電泳檢測試劑。