[發明專利]一種重組溶菌酶抗菌肽融合蛋白及其制備方法與應用有效
| 申請號： | 201911406640.1 | 申請日： | 2019-12-31 |
| 公開（公告）號： | CN111019001B | 公開（公告）日： | 2021-08-13 |
| 發明（設計）人： | 蔣加進;陳俊紅;陳濤;方光遠;戴鼎震;陸雨楠;黃翔宇 | 申請（專利權）人： | 金陵科技學院 |
| 主分類號： | C07K19/00 | 分類號： | C07K19/00;C07K14/00;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/16;C12N9/36;C12N15/62;C12N15/70;A61P31/04 |
| 代理公司： | 江蘇圣典律師事務所 32237 | 代理人： | 胡建華 |
| 地址： | 210038 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 重組 溶菌酶 抗菌 融合 蛋白 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種重組溶菌酶抗菌肽融合蛋白，其特征在于，其該蛋白從N端-C端依次由人溶菌酶的氨基酸編碼序列、連接肽的氨基酸編碼序列和抗菌肽的氨基酸編碼序列連接所得；
其中，所述人溶酶菌的氨基酸編碼序列如SEQ ID NO.1所示；
其中，所述連接肽的氨基酸編碼序列如SEQ ID NO.2所示；
其中，所述抗菌肽的氨基酸編碼序列如SEQ ID NO.3所示。
2.權利要求1所述的重組溶菌酶抗菌肽融合蛋白的編碼基因，其特征在于，所述編碼基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。
3.權利要求1所述的重組溶菌酶抗菌肽融合蛋白的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)將編碼重組溶菌酶抗菌肽融合蛋白的堿基序列克隆至大腸桿菌表達載體pET30a的NdeI和HindIII酶切位點之間，構建重組大腸桿菌表達載體；
(2)將步驟(1)構建的重組大腸桿菌表達載體轉化至大腸桿菌宿主細胞BL21中，IPTG誘導表達后，離心收集菌體，超聲波裂解，離心收集包涵體沉淀；
(3)將步驟(2)收集的包涵體沉淀進行純化，即得到重組溶菌酶抗菌肽融合蛋白。
4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，所述的純化為將包涵體沉淀用洗滌液洗滌，收集二次包涵體沉淀，再進行抽提，離心，收集上清液；利用QAE層析柱、蛋白純化儀對收集的上清液進行純化。
5.權利要求1所述的重組溶菌酶抗菌肽融合蛋白在制備抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、綠膿桿菌或枯草芽孢桿菌抗菌制劑中的應用。
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