[發明專利]一種沙漠藻細胞組合物的培養方法

在審

• 申請號: 201911404176.2
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN110923176A
• 公開（公告）日: 2020-03-27
• 發明（設計）人: 梁鈞;艾山江
• 申請（專利權）人: 梁鈞;艾山江
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種沙漠藻細胞組合物的培養方法，其特征在于：包括以下步驟：

Step.1取如下體積百分比的組分：沙漠集胞藻30％～60％，沙漠微囊藻10％～30％，沙漠綠囊藻10％～30％進行組合，組合后總體積百分比之和為100％；

Step.2培養液調配：取NH₄CI 0.4g，MgSO₄.7H₂O 0.156g，CaCI.H₂O 0.05g溶于去離子水，在溫度121℃，經過20min滅菌，得到儲備液A；取K₂HPO.3H₂O 0.142g，KH₂PO₄0.056g溶于去離子水中，采用022um濾膜過濾除菌，得到儲備液B；取三羥甲基氨基甲烷2.42g，HCI 1.5ml，冰乙酸1ml，CH₃COONa.3H₂O 2g，10mol/l的NaOH 1.8ml溶于去離子水，在溫度121℃，經過20min滅菌，得到儲備液C；取儲備液A10mL、儲備液B1mL、儲備液C10mL，混合后，用去離子水定容至1L，得到沙漠藻細胞組合物培養液；

Step.3(Na⁺，K⁺,Mg²⁺)離子濃度調整：將Step.2獲得的沙漠藻細胞組合物培養液中的(Na⁺，K⁺,Mg²⁺)離子的終濃度為10^-4mM，得到促進沙漠藻細胞組合物生長的培養基；

Step.4接種：無菌條件下，將活化的沙漠藻細胞組合物接種至含有Step.3獲得的促進沙漠藻細胞生長的培養基中，細胞初始濃度為10⁴～10⁵cells/mL；

Step.5培養：將接種后的沙漠藻細胞組合物置于光照架中培養，生長溫度28～30℃，首先在藍光條件下進行光照培養2天，藍光光照強度為5000lux，然后再轉接到紅光條件下進行光照培養5天，紅光光照強度為3000lux；光暗比18h:6h；

Step.6沙漠藻細胞組合物生長情況測定：每天從培養瓶中取少量培養液用血球計數板對沙漠藻細胞計數或用分光光度計測定培養液在540nm波長的光密度值，確定沙漠藻細胞的生長階段，當沙漠藻細胞數量達到10⁸cells/mL或OD540穩定時即完成培養；

Step.7取50mL完成培養的沙漠藻細胞組合物培養液，用0.22um濾膜通過真空抽濾器收集細胞進行細胞干重測定；

Step.8收集沙漠藻細胞干重測定：將Step.6獲得的收集有沙漠藻細胞的濾膜，置于105℃烘箱中烘干4h，干燥冷卻后稱量并計算，獲得單位體積培養液中細胞干物質含量(mg/L)。