[發明專利]一種鑒別水稻GS5基因和GLW7基因類型的引物及其應用

在審

• 申請號: 201911402905.0
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN110894542A
• 公開（公告）日: 2020-03-20
• 發明（設計）人: 張林;謝東;劉巧泉;卞中;鄒怡婷;范曉磊;李錢峰;張昌泉
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 柏尚春

1.一種鑒別GS5基因和GLW7基因類型的引物，其特征在于，包括如下引物：

(1)鑒別GS5基因類型的引物：其核苷酸序列如SEQ ID NO.：1～2所示；

(2)鑒別GLW7基因類型的引物：其核苷酸序列如SEQ ID NO.：3～4或SEQ ID NO.：5～6所示。

2.一種鑒別GS5基因或GLW7基因類型的試劑，其特征在于，包括SEQ ID NO.：1～6任一所示引物。

3.一種鑒別GS5基因和GLW7基因類型的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)提取待測水稻的基因組DNA；

(2)以步驟(1)得到的DNA為模板、SEQ ID NO.：1～2或SEQ ID NO.：3～4或SEQ ID NO.：5～6所示序列為引物分別進行PCR擴增；

(3)SEQ ID NO.：1～2所示引物擴增得到的產物用AluI內切酶進行酶切處理，SEQ IDNO.：3～4所示引物擴增得到的產物用HinfI內切酶進行酶切處理；然后將酶切產物與SEQID NO.：5～6所示引物的PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳；

(4)若SEQ ID NO.：1～2所示引物的PCR產物以AluI內切酶酶切后得到片段大小為229bpbp，則該水稻中GS5基因型為AAAC；若AluI內切酶酶切后得到片段大小為262bp，則水稻中GS5基因型為AAACAAAC；

若SEQ ID NO.：3～4所示引物的PCR產物以HinfI內切酶酶切后得到99bp，則該水稻中GLW7基因型為CTTCCACTTCCA，若HinfI內切酶酶切后得到片段大小為133bp，則該水稻中GLW7基因型為CTTCCACTTCCACTTCCA；

若SEQ ID NO.：5～6所示引物的PCR得到的片段大小為98bp則該水稻中GLW7基因型為CTTCCACTTCCA，若得到的片段大小為107bp，則該水稻中GLW7基因型為CTTCCACTTCCACTTCCA。

4.根據權利要求3所述的鑒別GS5基因和GLW7基因類型的方法，其特征在于，所述步驟(2)中，所述PCR擴增的條件如下：94℃變性3分鐘，隨后進行35個循環的“94℃變性20秒-55℃退火30秒-72℃延伸20秒”，最后72℃延伸5分鐘。