[發(fā)明專利]一種人血漿中艾司西酞普蘭的定量分析方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911402564.7
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN113125613A
• 公開（公告）日: 2021-07-16
• 發(fā)明（設計）人: 樓金芳;曲雙;樂艷;湯呂莎;沈卓凡
• 申請（專利權）人: 杭州百杏生物技術有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明提供了一種應用液質(zhì)聯(lián)用技術(HPLC?MS/MS)對人血漿中艾司西酞普蘭的定量分析方法。該方法提高了提取回收率、減少了基質(zhì)效應、增強了選擇性，減少對分析物和內(nèi)標定量分析的干擾以及改善了檢測靈敏度。

技術領域

本發(fā)明屬于生物分析領域，更具體地，涉及一種應用液質(zhì)聯(lián)用技術(HPLC-MS/MS)對人血漿中艾司西酞普蘭的定量分析方法。

背景技術

艾司西酞普蘭作為一個新型抗抑郁藥，能有效地改善患者的療效，艾司西酞普蘭花費的衛(wèi)生成本低，心血管系統(tǒng)及肝功能方面不良反應發(fā)生率低，療效好而不良反應少。

仿制藥一致性評價中，如何確定更好更穩(wěn)定的進行生物等效性評價，藥物的檢測分析顯得非常重要。艾司西酞普蘭生物樣品的成分復雜、基體干擾大，同時樣品較難獲得而且量少，被分析物的濃度通常很低，因此對生物樣品分離分析技術提出的要求越來越高，亟需建立一種高靈敏度、高選擇性的艾司西酞普蘭含量分析方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對上述現(xiàn)有技術中的不足，從樣品前處理和檢測技術兩方面著手，提供了一種人血漿中艾司西酞普蘭的定量分析方法。

本發(fā)明的上述目的是通過以下技術方案予以實現(xiàn)的。

一種人血漿中艾司西酞普蘭的定量分析方法，包括如下步驟：

(1)標準工作溶液的配制：稱取艾司西酞普蘭對照品于棕色容量瓶，加入甲醇溶液配制成濃度為50.00～500.0μg·mL^-1的艾司西酞普蘭儲備液，將所述艾司西酞普蘭儲備液用體積比7:3的甲醇-水溶液稀釋成濃度為2.000～500.0ng·mL^-1的艾司西酞普蘭標準曲線工作溶液；按上述步驟重復一次，配置成梯度濃度為2.000～400.0ng·mL^-1的艾司西酞普蘭質(zhì)控工作溶液；稱取一定量的內(nèi)標艾司西酞普蘭-d4至玻璃瓶中，加入甲醇配制成濃度為10.00～50.00μg·mL^-1的內(nèi)標儲備液，用體積比7:3的甲醇-水溶液稀釋成100.0ng·mL^-1的內(nèi)標工作溶液；所有儲備液及工作溶液在0～10℃下保存，備用；

取空白人正常血漿，分別加入所述艾司西酞普蘭標準曲線工作溶液，混勻，配置成相應梯度的標準曲線，其濃度范圍為0.2000～50.00ng·mL^-1；取空白人正常血漿，分別加入所述艾司西酞普蘭質(zhì)控工作溶液，混勻，配置成相應梯度的質(zhì)控樣品，其梯度濃度范圍為0.2000～40.00ng·mL^-1；

(2)樣品處理：取等體積的標準曲線、質(zhì)控樣品、試驗樣品、空白人血漿和水，往標準曲線、質(zhì)控樣品、試驗樣品中分別加入等體積的所述內(nèi)標工作溶液，往空白人血漿和水分別加入等體積的甲醇水溶液；向上述每個混合液中加入甲醇，混勻，離心，轉移上清液至96孔板中，將各提取物保存；

(3)標準曲線制作：將步驟(2)得到標準曲線、質(zhì)控樣品的提取物進行LC-MS/MS分析測定，以艾司西酞普蘭和內(nèi)標艾司西酞普蘭-d4的色譜峰面積比為縱坐標，以人血漿中艾司西酞普蘭的濃度為橫坐標制作標準曲線；

(4)定量分析：將試驗樣品按照步驟(3)的方法處理，并按步驟(3)所得的標準曲線方程計算，得到試驗樣品中艾司西酞普蘭的濃度。

艾司西酞普蘭的結構式如下：

優(yōu)選地，步驟(3)中所述LC-MS/MS分析測定過程的工作條件為：

a.色譜條件：色譜柱為Luna Omega Polar C18；流動相A：含0.1％甲酸和5mM甲酸銨的水溶液；流動相B：甲醇；柱溫箱溫度：40℃；流速：0.3mL/min；色譜柱平衡狀態(tài)時的柱壓：28.0～32.0MPa；洗脫方式為梯度洗脫；