[發(fā)明專利]一種用于酶底物法檢測大腸桿菌的熒光信號增強(qiáng)方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201911402212.1 | 申請日： | 2019-12-31 |
| 公開（公告）號： | CN111073950A | 公開（公告）日： | 2020-04-28 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 劉玲;董紹俊 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/10 | 分類號： | C12Q1/10;G01N21/64 |
| 代理公司： | 長春眾邦菁華知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 22214 | 代理人： | 周蕾 |
| 地址： | 130022 吉林*** | 國省代碼： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 用于 酶底物法 檢測 大腸桿菌 熒光 信號 增強(qiáng) 方法 | ||
1.一種用于酶底物法檢測大腸桿菌的熒光信號增強(qiáng)方法，其特征在于，該方法針對的酶底物是4-甲基傘形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷(MUG)；
其特征在于，
在大腸桿菌與酶底物培養(yǎng)基溫育結(jié)束之后，測量產(chǎn)物熒光之前，增加一步操作；所述操作為以堿性試劑將溶液調(diào)節(jié)至pH≥9之后，再測量產(chǎn)物熒光。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于酶底物法檢測大腸桿菌的熒光信號增強(qiáng)方法，其特征在于，調(diào)節(jié)溶液pH為9，10，11，或13。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于酶底物法檢測大腸桿菌的熒光信號增強(qiáng)方法，其特征在于，所述堿性試劑為NaOH、KOH、及氨水中的一種或多種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于酶底物法檢測大腸桿菌的熒光信號增強(qiáng)方法，其特征在于，其一種具體實施方式為：
步驟1、配制含MUG成分的培養(yǎng)液；
步驟2、將純培養(yǎng)大腸桿菌逐級稀釋得到的標(biāo)準(zhǔn)樣品或者實際待測樣品與步驟1的培養(yǎng)液混合；純培養(yǎng)大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)樣品的具體濃度用平板計數(shù)法(CFU)定量；
步驟3、將步驟2的培養(yǎng)液于35-44℃溫育至產(chǎn)生4-甲基傘形酮；
步驟4、將溫育結(jié)束后的培養(yǎng)液加堿性試劑調(diào)節(jié)至pH≥9；
步驟5、測量熒光強(qiáng)度，366nm激發(fā)，讀取450nm處的發(fā)射峰峰值；
步驟6、利用純培養(yǎng)大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度梯度，及步驟4的發(fā)射峰峰值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；將步驟4中測得的實際待測樣品在450nm處的發(fā)射峰峰值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算得出待測樣品中大腸桿菌的濃度。
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