[發(fā)明專利]一種CYP2C19基因多態(tài)性檢測試劑盒及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911399306.8
• 申請日: 2019-12-30
• 公開（公告）號: CN110938682A
• 公開（公告）日: 2020-03-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙平鋒
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢光谷聯(lián)合醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 武漢紅觀專利代理事務(wù)所(普通合伙) 42247
• 代理人: 張文俊

本發(fā)明公開了一種CYP2C19基因多態(tài)性檢測試劑盒及其應(yīng)用，該試劑盒包括用于檢測CYP2C19*2(G681A)的正反向引物、野生型檢測探針和突變型檢測探針，用于檢測CYP2C19*3(G636A)的正反向引物、野生型檢測探針和突變型檢測探針，以及兩個位點(diǎn)共用的野生型淬滅探針和突變型淬滅探針，且野生型檢測探針和突變型檢測探針分別標(biāo)記不同的熒光基團(tuán)。本發(fā)明利用鎖核酸技術(shù)提高了探針結(jié)合的特異性，結(jié)合多重?zé)晒釶CR技術(shù)檢測CYP2C19基因多態(tài)性，操作方便快捷，檢測結(jié)果易于判讀，特異性強(qiáng)，準(zhǔn)確度和靈敏度高，為氯吡格雷臨床用藥提供有效依據(jù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因檢測領(lǐng)域，尤其涉及一種CYP2C19基因多態(tài)性檢測試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

氯吡格雷，藥品名稱波立維，是一種由二磷酸腺苷受體介導(dǎo)的血小板聚集抑制劑，可用于防治心肌梗死、缺血性腦血栓、閉塞性脈管炎、動脈粥樣硬化及血栓栓塞引起的并發(fā)癥，在經(jīng)皮冠狀動脈介入治療術(shù)后的應(yīng)用中，可顯著的降低支架血栓的發(fā)生率，目前己做為皮冠狀動脈介入治療術(shù)后標(biāo)準(zhǔn)抗血小板治療的重要藥物之一。但是，使用氯吡格雷進(jìn)行長期治療的患者有時會再次地發(fā)生急性冠脈綜合征，嚴(yán)重的甚至危機(jī)生命。經(jīng)大量研究證明這是由于氯吡格雷介導(dǎo)的血小板聚集抑制率存在個體差異所導(dǎo)致的。因此，近年來，對氯吡格雷反應(yīng)存在個體差異的研究受到越來越多的關(guān)注。

氯吡格雷作為前藥本身并沒有抗凝作用，經(jīng)過細(xì)胞色素P450(Cytochrome P450，CYP)代謝后轉(zhuǎn)化成為活性代謝物，才能產(chǎn)生血小板抑制效應(yīng)。氯吡格雷在體內(nèi)的作用過程中，主要經(jīng)CYP2C19代謝，受CYP2C19基因多態(tài)性影響較大。根據(jù)CYP2C19代謝S-美芬妥英或其他探針?biāo)幬锏哪芰Γ蛇z傳決定的CYP2C19底物的代謝多態(tài)性在人群中有兩種表型，稱為強(qiáng)代謝型和弱代謝型，相應(yīng)的個體則分為強(qiáng)代謝者(extensive-metabolisers，EMs)和弱代謝者(poor-metaboisers，PMs)，相對與基因型分析結(jié)果，PMs有三種基因型(CYP2C19*2/*2，CYP2C19*2/*3或CYP2C19*3/*3)，EMs有兩種基因型為純合子(CYP2C19*1/*1)和雜合子(CYP2C19*1/*2，CYP2C19*1/*3)。中國人群中14％為CYP2C19慢代謝型，常規(guī)劑量的氯吡格雷在慢代謝型患者中產(chǎn)生的活性代謝物減少，抑制血小板聚集作用下降，形成血栓風(fēng)險增加。2010年美國食品藥品監(jiān)督管理局修改的氯吡格雷說明書中黑框警告：明確建議醫(yī)生對將要服用氯吡格雷的患者進(jìn)行CYP2C19基因分型檢測，針對患者基因型實(shí)施個性化用藥。因此，CYP2C19基因多態(tài)性檢測對于氯吡格雷臨床用藥有著重要意義。

目前，針對CYP2C19基因多態(tài)性檢測的方法有多種，主要包括DNA直接測序法、高分辨率溶解曲線法和液相芯片法。DNA直接測序法雖然是最常規(guī)的檢測方法且是金標(biāo)準(zhǔn)，但步驟繁瑣，耗時長。高分辨率溶解曲線法對儀器的需求較高，絕大部分的實(shí)時熒光定量PCR儀無法適用。液相芯片法操作過程復(fù)雜，且容易污染，假陽性率高。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提出了一種操作方便快速、特異性好、靈敏度高的CYP2C19基因多態(tài)性檢測試劑盒及其應(yīng)用。

本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：

第一方面，本發(fā)明提供了一種用于檢測CYP2C19基因多態(tài)性的引物探針組合物，用于檢測第681位點(diǎn)和第636位點(diǎn)基因多態(tài)性，包括以下引物及探針：

用于檢測CYP2C19*2(G681A)的引物探針：

正向引物1：5’-AAATTTCCCCATCAAGATAT-3’(SEQ ID NO.1)

反向引物1：5’-TACGCAAGCAGTCACATAAC-3’(SEQ ID NO.2)

野生型檢測探針1：5’-ATGACGTGATCTTGATACTATCATTGATTATTTCCCGG-3’(SEQ IDNO.3)