[發明專利]一種白細胞分類試劑

在審

• 申請號: 201911398265.0
• 申請日: 2019-12-30
• 公開（公告）號: CN111024563A
• 公開（公告）日: 2020-04-17
• 發明（設計）人: 白紅霞;劉玲
• 申請（專利權）人: 深圳開立生物醫療科技股份有限公司
• 主分類號: G01N15/00
• 分類號: G01N15/00;G01N15/10
• 代理公司: 深圳市深佳知識產權代理事務所(普通合伙) 44285
• 代理人: 夏歡

本發明涉及體外診斷技術領域，公開了一種白細胞分類試劑。本發明所述白細胞分類試劑包括聚氧乙烯型非離子表面活性劑、多元醇型非離子表面活性劑、緩沖液、電導率補充劑、滲透壓調節劑和防腐劑。本發明試劑配方簡單，不使用染料，主要成分僅有兩種特定的非離子表面活性劑，避免了其他試劑可能會使得細胞損傷過度或者同一類細胞體積大小分布跨度太大，不能夠有效分類的缺陷，能夠將白細胞分為界限清楚的單核細胞、淋巴細胞、中性粒細胞(包含嗜堿性粒細胞)和嗜酸性粒細胞，同時還能對幼稚粒細胞進行分類。

技術領域

本發明涉及體外診斷技術領域，具體涉及一種白細胞分類試劑。

背景技術

人體血液中的細胞大致分為三類：紅細胞、白細胞和血小板，其中白細胞又可以分為單核細胞、淋巴細胞和粒細胞(包括中性粒細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞)五個亞類。血細胞在骨髓中生成，從未成熟細胞分化、成熟后再進入末梢血液發揮各自功能。正常健康人的末梢血中的白細胞的各個亞類的比例是恒定的，當人體出現一些疾病時，就會表現出某一類白細胞數量的增大或減小。此外，在正常健康人的靜脈血中并不會出現一些未發育成熟的DNA含量比正常白細胞高的未成熟白細胞。而在患有白血病、癌癥骨髓轉移和重癥感染癥等病人的靜脈血中則往往會出現未成熟白細胞，常見的是幼稚粒細胞。在支氣管哮喘、寄生蟲病、過敏性疾病、慢性粒細胞白血病等疾病中常伴隨著嗜酸性粒細胞增多。因此，將血液樣本中各白細胞分類并進行測定在疾病的診斷中具有非常重要的意義。

中國專利CN101008641B介紹了一種幼稚白細胞分析用試劑盒，其中第一試劑是含有非離子表面活性劑和氨基酸的溶血劑對血樣進行處理，使幼稚白細胞保持生存狀態而使其他白細胞損傷，通過包含熒光染料的第二試劑對受損的成熟白細胞進行染色，幼稚白細胞幾乎不染色，根據染色強度的不同即可分辨出成熟白細胞和幼稚白細胞。但該方法只能將白細胞分成單核細胞、淋巴細胞和粒細胞三大類，無法對白細胞進行五分類。此外，現有技術中還存在多種對白細胞分類的試劑盒，但普遍不能對幼稚粒細胞進行分類，且存在各類白細胞分界不清的缺陷；

目前能夠對嗜酸性粒細胞進行準確分類的試劑基本都需要染料來對嗜酸性粒細胞進行染色。檢測幼稚粒細胞的試劑或試劑盒更是需要熒光染料對核酸進行染色，試劑配方難度大，原料價格昂貴，而且需要在特定能夠檢測熒光信號的血液分析儀上使用，導致醫療成本高。Sysmex XN-9000(及其配套試劑)就屬于這種情形，其是目前在醫院應用比較廣泛的儀器，它的分類檢測原理是利用溶血劑對白細胞進行熒光染色后，通過半導體激光流式細胞術對細胞進行分類。配套試劑包括：血細胞分析用稀釋液-CELLPACK DFL、血細胞分析用溶血劑-SULFOLYSER和血細胞分析用溶血劑-Lysercell WPC(用于分類)。該試劑成分復雜，含有染料，會對環境造成污染。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種白細胞分類試劑，使其能夠在不使用染料的前提下對淋巴細胞、單核細胞、中性粒細胞、嗜酸性粒細胞以及幼稚粒細胞進行分類，且各類細胞邊界清晰明顯，適用于SC-9000全自動血液分析儀。

為實現上述發明目的，本發明提供如下技術方案：

一種白細胞分類試劑，包括聚氧乙烯型非離子表面活性劑、多元醇型非離子表面活性劑、緩沖液、電導率補充劑、滲透壓調節劑和防腐劑。

針對目前白細胞分類試劑普遍無法分類幼稚粒細胞以及各類白細胞分界模糊的缺點，本發明在不使用熒光染料的前提下，選擇特定的兩類非離子表面活性劑來溶解紅細胞和血小板，使白細胞的細胞膜部分損傷，穩定幼稚粒細胞，同時配合滲透壓調節劑改變紅細胞的脆性，并使白細胞保持特定形態，改變不同類群白細胞之間的分界，基于電阻抗法和激光散射法對白細胞進行五分類，能夠將淋巴細胞、單核細胞、中性粒細胞、嗜酸性粒細胞顯著分離，同時能夠分離出幼稚粒細胞。