[發(fā)明專利]大網(wǎng)膜脫細胞基質(zhì)材料的制備方法及軟骨組織的構(gòu)建方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201911397490.2 | 申請日： | 2019-12-30 |
| 公開（公告）號： | CN111110919A | 公開（公告）日： | 2020-05-08 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 萬綿水;林創(chuàng)鑫 | 申請（專利權(quán)）人： | 廣東泓志生物科技有限公司 |
| 主分類號： | A61L27/36 | 分類號： | A61L27/36;C12N5/077 |
| 代理公司： | 深圳市君之泉知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44366 | 代理人： | 呂戰(zhàn)竹 |
| 地址： | 515041 廣東省汕頭*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 網(wǎng)膜 細胞 基質(zhì) 材料 制備 方法 軟骨 組織 構(gòu)建 | ||
1.一種大網(wǎng)膜脫細胞基質(zhì)材料的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括步驟：
S100、對大網(wǎng)膜進行清洗；
S200、對清洗后的大網(wǎng)膜進行凍融循環(huán)處理得到第一中間物；
S300、將所述第一中間物加入含有胰蛋白酶和苯甲基磺酰氟、PH值為7.8至8.2的溶液中，并持續(xù)第一預定時長得到第二中間物；
S400、對所述第二中間物進行脫脂處理，然后清洗得到第三中間物；
S500、將所述第三中間物加入含有胰蛋白酶和苯甲基磺酰氟、PH值為7.8至8.2的溶液中，并持續(xù)第二預定時長得到第四中間物；
S600、對所述第四中間物進行脫組織細胞處理，然后清洗得到第五中間物；
S700、將所述第五中間物進行干燥和滅菌處理，得到所述大網(wǎng)膜脫細胞基質(zhì)材料。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大網(wǎng)膜脫細胞基質(zhì)材料的制備方法，其特征在于，在所述步驟S100中，采用生理鹽水對所述大網(wǎng)膜進行清洗。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大網(wǎng)膜脫細胞基質(zhì)材料的制備方法，其特征在于，在所述步驟S200中，將清洗后的大網(wǎng)膜加入到含有三羥甲基氨基甲烷和苯甲基磺酰氟且PH值為7.8至8.2的緩沖液中進行所述凍融循環(huán)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大網(wǎng)膜脫細胞基質(zhì)材料的制備方法，其特征在于，在所述步驟S300中，所述胰蛋白酶的質(zhì)量百分比為0.1％至0.5％，所述苯甲基磺酰氟的質(zhì)量百分比為0.1％至1％；
在所述步驟S500中，所述胰蛋白酶的質(zhì)量百分比為0.1％至0.5％，所述苯甲基磺酰氟的質(zhì)量百分比為0.1％至1％。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大網(wǎng)膜脫細胞基質(zhì)材料的制備方法，其特征在于，在所述步驟S400中，采用異丙醇、正丁醇、乙腈、乙醇、甲醇中的一種或至少兩種的混合物對所述第二中間物進行脫脂處理。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大網(wǎng)膜脫細胞基質(zhì)材料的制備方法，其特征在于，在所述步驟S600中，采用含有鎂鹽、脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶以及脂肪酶的溶液對所述第四中間物進行脫組織細胞處理。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大網(wǎng)膜脫細胞基質(zhì)材料的制備方法，其特征在于，在所述步驟S600中，首先采用磷酸緩沖鹽溶液進行清洗，然后再采用乙醇進行清洗。
8.一種軟骨組織的構(gòu)建方法，其特征在于，所述構(gòu)建方法包括步驟：
S10、將用于軟骨組織構(gòu)建的種子細胞置于營養(yǎng)液中，并持續(xù)第三預定時長；
S20、從所述步驟S10得到的培養(yǎng)液中取細胞懸液，并接種于采用如權(quán)利要求1至7任一項所述的制備方法制備的大網(wǎng)膜脫細胞基質(zhì)材料上；
S30、將接種后的大網(wǎng)膜脫細胞基質(zhì)材料置于培養(yǎng)液中進行培養(yǎng)，并持續(xù)第四預定時長，得到構(gòu)建的軟骨組織。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的軟骨組織的構(gòu)建方法，其特征在于，在所述步驟S10中，所述營養(yǎng)液為含有胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)液。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的軟骨組織的構(gòu)建方法，其特征在于，所述培養(yǎng)液的液面高于所述大網(wǎng)膜脫細胞基質(zhì)材料的表面，且高度差小于1mm。
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