[發(fā)明專利]一種超敏心肌肌鈣蛋白I檢測方法和試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911395212.3
• 申請日: 2019-12-30
• 公開（公告）號: CN111308084B
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉麗萍;于鶇;盧盛萍;遲晨;黃春連;何智丹;李斌;王凱;李文靜;李然;覃素妮
• 申請（專利權(quán)）人: 菲鵬生物股份有限公司;廣東菲鵬生物有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責(zé)任公司 11021
• 代理人: 柴云峰

本發(fā)明涉及一種超敏心肌肌鈣蛋白I檢測方法和試劑盒。所述試劑盒包括用于檢測來自受試者樣品中心肌肌鈣蛋白I的第一組抗體和第二組抗體，所述抗體選自特異性結(jié)合下述氨基酸片段的抗體：抗體1：第13?29位；抗體2：第27?39位；抗體3：第41?49位；抗體4：第85?92位。本發(fā)明的方法和試劑盒靈敏度高，操作簡單，可用于心肌肌鈣蛋白I的動態(tài)監(jiān)測。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及蛋白檢測領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及超敏心肌肌鈣蛋白I的檢測方法和試劑盒。

背景技術(shù)

血液心肌肌鈣蛋白I(cTnI:cardiac troponin I)的升高對診斷心肌損傷/壞死(myocardial necrosis)具有非常高的敏感性和特異性。目前cTnI已成為心梗的臨床診斷，治療，監(jiān)測必不可少的標志物。

心肌肌鈣蛋白在正常人微量存在，但在心肌梗死發(fā)生時，心肌細胞毀損造成cTnI釋放入血，無論ST段是否抬高，cTnI都會急劇升高，在24小時左右達到高峰，7-10天后下降至正常水平。cTnI升高的幅度與心肌細胞壞死程度有一定程度的關(guān)聯(lián)。如果病人血中cTnI在下降過程中再次升高，意味著心肌再次損傷/壞死。cTnI濃度的變化與AC(AcuteCoronary Syndrome)危險程度、治療決策和預(yù)后明確相關(guān)。

超敏肌鈣蛋白I(hs-cTnI)在急性心肌梗死患者診斷中具有著較高的靈敏度與特異性，對于提升急性心肌梗死的臨床診斷準確率具有著非常關(guān)鍵的意義。超敏肌鈣蛋白I的一般檢測標準為：正常人第99百分位點處變異系數(shù)(CV)≤10％，臨床可接受標準為≤20％，表觀正常人檢出率≥50％。所以和常規(guī)cTnI檢測相比，hs-cTnI的靈敏度要求非常高，cTnI靈敏度的增加提高了早期AMI檢測的檢出率。但是在檢驗靈敏性提高的同時也增加了AMI和其他一些疾病中引起cTnI升高的陽性率，尤其是對于那些可能存在慢性心肌損傷的結(jié)構(gòu)性心臟病患者。然而在大多數(shù)案例中，這種慢性心肌損傷一般不會表現(xiàn)出顯著hs-cTnI的動態(tài)改變。所以，通過系列cTnI檢測來判斷隨著時間變化的ΔcTnI可以有效鑒別AMI和結(jié)構(gòu)性心臟病患者。

目前市面上也不斷地涌入大量的POCT產(chǎn)品。然而，這些產(chǎn)品多采用某一段抗原表位的抗體對抗原進行檢測，普遍存在漏檢和無法達到正常人檢出率≥50％。因此，當前試劑盒性能普遍達不到超敏的要求，比如檢出率低、靈敏度特異性不夠等，不能監(jiān)測病情的發(fā)展趨勢、不能滿足檢測不同時間患者血液中心肌肌鈣蛋白含量變化等要求。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明人經(jīng)過大量理論研究和實驗摸索，充分考慮心肌肌鈣蛋白I的結(jié)構(gòu)特性，對各種待測超敏肌鈣蛋白抗原區(qū)間和捕獲抗體進行分析研究，并通過大量交叉實驗和篩選，獲得了能夠用于心肌肌鈣蛋白I檢測的心肌肌鈣蛋白I抗原區(qū)域組合。發(fā)明人已經(jīng)證明針對所選抗原表位區(qū)域的抗體出乎意料的能夠相互組合用于hs-cTnI的高靈敏度和特異性檢測。發(fā)明人還令人吃驚地發(fā)現(xiàn)針對所選抗原表位區(qū)域的抗體能夠相互補充各自檢測的不足，提高檢出率，并能夠用于動態(tài)監(jiān)測病情的發(fā)展趨勢，能夠隨時監(jiān)測受試者如心肌梗塞患者的cTnI含量，這對基層醫(yī)院或者病房尤其重要。

在一些實施方案中，本發(fā)明可以包括下述一項或多項：

1.一種心肌肌鈣蛋白I檢測試劑盒，其包括用于檢測來自受試者樣品中心肌肌鈣蛋白I的第一組抗體和第二組抗體，其中第一組抗體包括抗體1至抗體4之中的一種、兩種或三種的抗體，第二組抗體包括抗體1至抗體4中除了第一組抗體之外的抗體，其中抗體1至抗體4分別為特異性結(jié)合心肌肌鈣蛋白I的下述氨基酸片段的抗體：

抗體1：特異性結(jié)合心肌肌鈣蛋白I的第13-29位氨基酸片段；

抗體2：特異性結(jié)合心肌肌鈣蛋白I的第27-39位氨基酸片段；

抗體3：特異性結(jié)合心肌肌鈣蛋白I的第41-49位氨基酸片段；

抗體4：特異性結(jié)合心肌肌鈣蛋白I的第85-92位氨基酸片段。