[發明專利]檢測SOS1基因突變的方法、引物和試劑盒

在審

• 申請號: 201911392159.1
• 申請日: 2019-12-30
• 公開（公告）號: CN110964806A
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發明（設計）人: 柏忠良
• 申請（專利權）人: 武漢艾迪康醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 浙江千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 黎雙華

本發明公開了檢測Noonan綜合征相關的SOS1基因突變的方法、引物和試劑盒，所述引物、試劑盒均包括針對SOS1基因致病突變對應顯子的擴增引物和測序引物。基于PCR擴增和Sanger測序，本發明可快速地檢測Noonan綜合征相關的SOS1基因突變位點的突變情況。

技術領域

本發明屬生命科學和生物技術領域，特別涉及檢測Noonan綜合征相關的SOS1基因突變的方法、引物和試劑盒。

背景技術

Noonan綜合征(NS)是一種先天遺傳性疾病，為常染色體顯性遺傳病，呈完全外顯率，但表現度不一，而且大多數的病例屬散發類型。該病由Noonan在1968年首次報道，存活的新生兒中發病率約為1/25001～1/1000，男女均可發病。該病的主要特征包括特殊面容、身材矮小、胸部畸形，并且會伴有先天性心臟病等。Noonan綜合征的病理生理機制還不明確，但是目前已經確定該病與RAS/RAF/MEK/ERK信號轉導通路上的部分基因突變相關，RAS/RAF/MEK/ERK信號轉導通路是細胞生長的重要調控因素。其中約50％的患者出現PTPN11基因突變，10％～13％患者出現SOS1突變，另外RAF1、RIT1、RAS、NRAS、BRAF等基因突變也有出現，但患者數量較少。因此檢測非PTPN11基因突變的Noonan綜合征的患者可以嘗試檢測SOS1基因的突變。

SOS1基因定位于人的2號染色體q24.1，該基因編碼一種蛋白質，該蛋白質是RAS蛋白的鳥嘌呤核苷酸交換因子，RAS蛋白是結合鳥嘌呤核苷酸并參與信號轉導途徑的膜蛋白。GTP結合激活，GTP水解使RAS蛋白失活。該基因的產物可通過促進GTP與GDP的交換來調節RAS蛋白。該基因的突變與4型Noonan綜合征有關。該基因由23個外顯子和25個內含子組成，編碼的蛋白產物為1333個氨基酸長度的蛋白前體。SOS1基因突變以錯義突變為主，已報到的熱點突變有R552G、Q477R、P894R和I733F等。

發明內容

本發明采用Sanger測序法檢測Noonan綜合征相關的SOS1基因突變，并且設計的引物分別擴增包含基因SOS1全外顯子上的DNA片段，通過測序結果的分析，可以很直觀地了解Noonan綜合征相關的SOS1基因突變位點的突變情況，擴增引物設計時加上了M13接頭，并使用M13作為測序引物，簡化操作步驟和節約了檢測成本。

本發明提供了檢測SOS1基因突變的引物，其特征在于，SOS1基因突變選自R552G、Q477R、P894R、I733F突變，所述引物包括至少一對用于擴增SOS1基因的擴增引物和一對測序引物M13F和M13R，所述擴增引物選自自SOS1-E1-F/SOS1-E1-R、SOS1-E2-F/SOS1-E2-R、SOS1-E3-F/SOS1-E3-R、SOS1-E4-F/SOS1-E4-R、SOS1-E5-F/SOS1-E5-F、SOS1-E6-F/SOS1-E6-R、SOS1-E7_8-F/SOS1-E7_8-R、、SOS1-E9-F/SOS1-E9-R、SOS1-E10-F/SOS1-E10-R、SOS1-E11_12-F/SOS1-E11_12-R、SOS1-E13-F/SOS1-E13-R、SOS1-E14-F/SOS1-E14-R、SOS1-E15-F/SOS1-E15-R、SOS1-E16_17-F/SOS1-E16_17-R、SOS1-E18_19-F/SOS1-E18_19-R、SOS1-E20-F/SOS1-E20-R、SOS1-E21-F/SOS1-E21-R、SOS1-E22-F/SOS1-E22-R、SOS1-E23-F/SOS1-E23-R，其堿基序列為：

SOS1-E1-F：TAGTCATCACCCACCCTTGCTGTAAAACGACGGCCAGT；

SOS1-E1-R：ATGTCAACACCGAGAGCCAGAACAGCTATGACCATG

SOS1-E2-F：AGTGCTGGCATTACAGGCATTGTAAAACGACGGCCAGT；