[發(fā)明專利]神經(jīng)干細胞的培養(yǎng)方法及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911392120.X
• 申請日: 2019-12-30
• 公開（公告）號: CN110938599B
• 公開（公告）日: 2020-09-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬旭艷;馬旭光;鄭茂東
• 申請（專利權(quán)）人: 馬旭艷;馬旭光
• 主分類號: C12N5/0797
• 分類號: C12N5/0797;A61K31/7048;A61P25/28
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務(wù)所 52100
• 代理人: 李亮;李余江

本發(fā)明公開了一種神經(jīng)干細胞的培養(yǎng)方法，其包括：培養(yǎng)過程中應(yīng)用了開口箭皂苷J。其步驟如下：（1）分離培養(yǎng)原代神經(jīng)干細胞進行培養(yǎng)；（2）箭皂苷J干預(yù)培養(yǎng)。本發(fā)明創(chuàng)新地將開口箭皂苷J應(yīng)用于神經(jīng)干細胞的培養(yǎng)，而且由于開口箭皂苷J來源于傳統(tǒng)醫(yī)藥，其長期安全性有保障，未來具有直接應(yīng)用于體內(nèi)的潛力，尤其是作為阿爾茨海默病的潛在藥物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種神經(jīng)干細胞的培養(yǎng)方法及其應(yīng)用，屬于細胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

神經(jīng)干細胞是神經(jīng)系統(tǒng)的先祖細胞，具有自我更新和多向分化的特性，可以分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)細胞。體外培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)干細胞可在絲裂原的作用下維持其增殖狀態(tài)。但在正常情況下，腦內(nèi)神經(jīng)干細胞數(shù)目太少，且大部分處于靜息狀態(tài)，所以面對較難解決的神經(jīng)退行性疾病，例如阿爾茨海默病，則可從促進神經(jīng)干細胞增殖方面入手，研究和解決神經(jīng)損傷疾病和神經(jīng)功能缺失的問題。

現(xiàn)有技術(shù)已經(jīng)披露白藜蘆醇可保護神經(jīng)干細胞氧糖剝奪損傷，川芎嗪用于保護谷氨酸損害的神經(jīng)元，在APP轉(zhuǎn)基因小鼠神經(jīng)干細胞誘導(dǎo)分化過程中，五味子酮可以明顯降低Tau蛋白在396、262位點的磷酸化水平，減輕神經(jīng)元損傷，但其磷酸化程度并未達到陰性細胞水平。

阿爾茨海默病是一種嚴重的中樞神經(jīng)退行性疾病，公認的特征性病理改變?yōu)椋害聵拥矸蹣拥鞍椎某练e并形成細胞外老年斑。另外，微管相關(guān)蛋白tau異常過度磷酸化，形成雙股螺旋細絲，最終在腦內(nèi)產(chǎn)生大量神經(jīng)元纖維纏結(jié)以及神經(jīng)元丟失、體積變小、突觸丟失也是其病理表現(xiàn)。阿爾茨海默病的主要臨床表現(xiàn)為：認知功能出現(xiàn)障礙、失用、失認、視覺空間、抽象思維技能損害等。近年來，隨著中國人口老齡化的到來，阿爾茨海默病的發(fā)病率逐年上升，越來越引起人們的關(guān)注。

本發(fā)明旨在提供一種神經(jīng)干細胞的培養(yǎng)方法及其應(yīng)用，具體為向高效刺激神經(jīng)干細胞增殖，在制備阿爾茨海默病治療和預(yù)防藥物上可能具有很大的應(yīng)用潛力。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種神經(jīng)干細胞的培養(yǎng)方法及其應(yīng)用，具體為向高效刺激神經(jīng)干細胞增殖，在制備阿爾茨海默病治療和預(yù)防藥物上可能具有很大的應(yīng)用潛力。

開口箭又名巖芪、大寒藥、竹根參或牛尾七等，是百合科(Liliaceae)鈴蘭族(Convallariaceae)開口箭屬(Tupistra Ker-Gawl)植物開口箭(Tupistra chinensisBaker)的根莖，主要用于治療咽喉腫痛、胃痛、跌打損傷及毒蛇咬傷等.研究顯示，開口箭屬植物的主要化學(xué)成分為甾體皂苷類、黃酮類和強心苷類，具有抗炎、抗菌和抗腫瘤等多重活性。肖艷華等從開口箭中分離得到多個化合物，其中一種新的化合物引起我們的注意，在后續(xù)的研究中，我們意外的發(fā)現(xiàn)，其沒有細胞毒性，還可以有效誘導(dǎo)刺激神經(jīng)干細胞增殖。

所述新化合物為開口箭皂苷J，分子式為C₃₃H₅₅O₉。其結(jié)構(gòu)式如下：

本發(fā)明團隊意外發(fā)現(xiàn)其以有效誘導(dǎo)刺激神經(jīng)干細胞增殖，在神經(jīng)醫(yī)療領(lǐng)域具有很大的應(yīng)用潛力。

本研發(fā)團隊首次研究了開口箭皂苷J的生理活性，并發(fā)現(xiàn)其可以用于刺激神經(jīng)干細胞增殖。

本發(fā)明所需要解決的技術(shù)問題可以通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)。

一種神經(jīng)干細胞的培養(yǎng)方法，其包括：

培養(yǎng)過程中應(yīng)用了開口箭皂苷J。

所述開口箭皂苷J分子式為C₃₃H₅₅O₉。其結(jié)構(gòu)式如下：

作為優(yōu)選，其步驟如下：

(1)分離培養(yǎng)原代神經(jīng)干細胞進行培養(yǎng)；