[發明專利]基于Ts31基因的旋毛蟲抗體檢測試紙條及其應用

在審

• 申請號: 201911388216.9
• 申請日: 2019-12-30
• 公開（公告）號: CN110954704A
• 公開（公告）日: 2020-04-03
• 發明（設計）人: 劉河冰;溫凱;楊柳;李蓉蓉;馬立才
• 申請（專利權）人: 北京維德維康生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558;C12N15/70;C07K14/435
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.旋毛蟲抗體檢測試紙條，包括樣品吸收墊、膠體金墊、反應膜、吸水墊和背板，所述樣品吸收墊上有加樣孔；所述膠體金墊上包被有膠體金標記的SPA；所述反應膜上有檢測區和質控區，其中檢測區包被旋毛蟲Ts31重組蛋白，所述旋毛蟲Ts31重組蛋白是使用Ts31基因構建重組表達質粒pET28a-Ts31，經大腸桿菌表達系統表達純化獲得的；所述質控區包被雞抗SPA。

2.權利要求1所訴旋毛蟲抗體檢測試紙條，樣品吸收墊材質為濾血膜；所述膠體金墊材質為玻璃纖維素膜；所述反應膜材質為硝酸纖維素膜；所述吸水墊材質為吸水紙；所述背板為PVC。

3.權利要求1所訴旋毛蟲抗體檢測試紙條制備方法，包括如下步驟：

1）旋毛蟲Ts31重組蛋白的制備：以旋毛蟲cDNA文庫為模版，針對旋毛蟲Ts31基因序列設計特異性引物，通過PCR擴增目的片段并克隆至表達載體pET28a，將成功構建的重組表達質粒pET28a-Ts31轉化至大腸桿菌BL21（DE3）中，IPTG誘導表達，經親和層析和分子篩層析高度純化后得到Ts31重組蛋白；

2）膠體金墊的制備：將金標記的SPA噴涂在膠體金墊上，真空抽干后干燥保存備用；

3）檢測區和質控區的制備：將步驟1）中獲得的旋毛蟲Ts31重組蛋白稀釋為1.0mg/mL的Ts31溶液與1.5mg/mL雞抗SPA分別噴涂在反應膜上，形成檢測線與質控線，37℃干燥16h，密封保存備用；

4）試紙條的組裝：在背板上沿試紙條的軸向依次將樣品吸收墊、膠體金墊、反應膜、吸水墊粘貼在背板上，制成試紙條。

4.權利要求3所述旋毛蟲Ts31重組蛋白制備時所用的引物如序列表的序列1所示，旋毛蟲Ts31重組蛋白核酸序列如序列表的序列2所示。

5.權利要求3所述膠體金墊的制備，其特征在于步驟2）所訴噴涂，噴膜量為1.5μL/cm。

6.權利要求3所述檢測區和質控區的制備，其特征在于步驟3）所訴噴涂，噴膜量為0.8μL/cm。

7.權利要求1所訴旋毛蟲抗體檢測試紙條在旋毛蟲病檢測中的應用。