[發明專利]一種單檢測線的多指標時間分辨熒光免疫分析檢測方法

在審

• 申請號: 201911388078.4
• 申請日: 2019-12-30
• 公開（公告）號: CN111089968A
• 公開（公告）日: 2020-05-01
• 發明（設計）人: 吳英松;陳振華;劉天才
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/577;G01N33/558
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 趙蕊紅

1.一種單檢測線的多指標時間分辨熒光免疫分析檢測系統，其特征在于，包括單檢測線的多指標時間分辨熒光免疫分析檢測試紙條和多色鑭系元素編碼的功能性時間分辨熒光免疫分析納米微球探針；

所述檢測試紙條由粘性底襯、樣品墊、硝酸纖維素膜和吸水紙組成；所述硝酸纖維素膜上依次涂有檢測線T和質控線C；所述檢測線T由抗BTA單克隆IgG、抗NMP-22單克隆IgG和抗CYFRA 21-1單克隆IgG的混合物涂層組成；質控線C由羊抗兔IgG涂層組成；

所述多色鑭系元素編碼的功能性時間分辨熒光免疫分析納米微球探針包括檢測探針和質控探針，所述多色鑭系元素包括鋱元素、銪元素和釤元素；

所述檢測探針包括抗BTA探針、抗NMP-22探針和抗CYFRA 21-1探針，所述抗BTA探針由抗BTA單克隆IgG和鋱元素編碼的聚苯乙烯納米微球組成，所述抗NMP-22探針由抗NMP-22單克隆IgG和銪元素編碼的聚苯乙烯納米微球組成，所述抗CYFRA 21-1探針由抗CYFRA 21-1單克隆IgG和釤元素編碼的聚苯乙烯納米微球組成；

所述質控探針由兔IgG和等量的鋱元素、銪元素和釤元素編碼的聚苯乙烯納米微球組成；

所述檢測探針與所述檢測線T的單克隆IgG捕獲目標抗原形成雙抗體夾心免疫復合物，并固定在所述檢測線T；所述質控探針的兔IgG與所述質控線C的羊抗兔IgG形成免疫復合物，并固定在所述質控線C；

利用熒光讀數儀讀取檢測線T和質控線C處的鋱元素、銪元素和釤元素對應的熒光信號，計算不同濃度抗原工作液的同種元素熒光信號的T/C值，并以所述同種鑭系元素的T/C值為Y軸，對應目標抗原濃度為X軸，擬合目標抗原濃度的標準工作曲線，用于檢測分析待測樣品中的目標抗原濃度。

2.根據權利要求1所述的單檢測線的多指標時間分辨熒光免疫分析檢測系統，其特征在于，所述檢測試紙條的制備方法按以下步驟進行：

將未經裁切的樣品墊、硝酸纖維素膜、吸水紙依次搭接于粘性底襯上，所述硝酸纖維素膜的兩個搭接端分別位于樣品墊搭接端和吸水紙搭接端的下方；按所述樣品墊、硝酸纖維素膜和吸水紙的分布方向裁切，獲得檢測試紙條；

所述樣品墊是預先制備的，樣品墊的制備具體為：

將樣品墊浸泡在含有1wt％聚乙烯吡咯烷酮，0.2wt％干酪素鈉，1wt％Triton X-100和0.1wt％疊氮鈉的0.1mol/L硼酸鹽緩沖液中，靜置1h后取出，放置于35～38℃的鼓風干燥箱內烘干過夜，干燥封存備用；

所述硝酸纖維素膜是預先制備的，硝酸纖維素膜的制備具體為：

將抗BTA單克隆IgG、抗NMP-22單克隆IgG和抗CYFRA 21-1單克隆IgG分別用10mM磷酸鹽緩沖液稀釋至1.5～2mg/mL，等體積混合三種單克隆捕獲IgG溶液并裝入劃膜儀，以0.8～1.0μL/cm的溶液劃線濃度，將單克隆捕獲IgG混合溶液均勻地噴涂在硝酸纖維素膜上形成檢測線T；將羊抗兔IgG用10mM磷酸鹽緩沖液稀釋至1.5～2mg/mL后，裝入劃膜儀，以0.6～0.8μL/cm的溶液劃線濃度，將羊抗兔IgG均勻地噴涂在硝酸纖維素膜上形成質控線C；噴涂完畢后將硝酸纖維素膜放置于36～38℃的鼓風干燥箱內烘干過夜，干燥封存備用。

3.根據權利要求2所述的單檢測線的多指標時間分辨熒光免疫分析檢測系統，其特征在于，所述檢測線T接近樣品墊，所述質控線C接近吸水紙；所述檢測線T和質控線C平行設置，兩者相距3～4mm；所述檢測線T和質控線C均為實直線。

4.根據權利要求2所述的單檢測線的多指標時間分辨熒光免疫分析檢測系統，其特征在于，所述檢測試紙條總長度為5.5～6.0cm，寬度為3～4mm；所述樣品墊與硝酸纖維素膜搭接端的長度為4mm，所述吸水紙與硝酸纖維素膜搭接端的長度為2mm；所述樣品墊和吸水紙分別與粘性底襯相接觸部分的長度為1～1.5cm。

5.根據權利要求2所述的單檢測線的多指標時間分辨熒光免疫分析檢測系統，其特征在于，所述10mM磷酸鹽緩沖液的pH值為7.3～7.4，含0.9wt％氯化鈉、0.3wt％海藻糖和0.1wt％疊氮鈉。